人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)酶聯(lián)免疫分析 藥品名稱： 通用名：人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)酶聯(lián)免疫分析試劑盒 使用目的： 本試劑盒用于測(cè)定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)含量 實(shí)驗(yàn)原理 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)水平用純化的人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)，再與HRP標(biāo)記的HLA-C抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色顏色的深淺和樣品中的人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)呈正相關(guān)用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)濃度 試劑盒組成 1 20倍濃縮洗滌液 30ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（180g/L） 0.5ml×1瓶 3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說(shuō)明書 1份 5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個(gè) 標(biāo)本要求 1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性 操作步驟 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在**第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100l，然后在**第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50l，混勻；然后從**孔第二孔中各取100l分別加到第三孔和第四孔，再在第三第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50l，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50l棄掉，再各取50l分別加到第五第六孔中，再在第五第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五第六孔中各取50l分別加到第七第八孔中，再在第七第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50l，混勻后從第七第八孔中分別取50l加到第九第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50l，混勻后從第九第十孔中各取50l棄掉（稀釋后各孔加樣量都為50l，濃度分別為120g/L，80g/L ，40g/L，20g/L， 10g/L） 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）待測(cè)樣品孔在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測(cè)樣品10l（樣品Z終稀釋度為5倍）加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻 溫育：用封板膜封板后置37溫育30分鐘 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50l，空白孔除外 溫育：操作同3 洗滌：操作同5 顯色：每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37避光顯色15分鐘. 終止：每孔加終止液50l，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色） 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值） 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行