【概述】

KDN型系列定氮儀（蛋白質(zhì)測定儀）是本公司自行設(shè)計自行制造，采用化學(xué)與物理學(xué)相結(jié)合完成蛋白質(zhì)含量測定的成套儀器。本儀器以經(jīng)典的凱氏定氮法為工作原理，以快速、準(zhǔn)確、低耗為目標(biāo)，研制而成的新一代蛋白質(zhì)測定儀。

本儀器主要有KDN型系列蒸餾裝置和HYP系列消化裝置兩大裝置組成：KDN型蒸餾裝置采用了電熱蒸汽發(fā)生器，特定的微機(jī)程序控制；從而能滿足不同地區(qū)不同水質(zhì)的安全使用；保證在長時間不更換蒸餾水的條件下正常工作。節(jié)約了大量的蒸餾水和化驗成本。能連續(xù)不斷地進(jìn)行微量和常量蒸餾作業(yè)。電加熱消化裝置采用溫控數(shù)顯，使用溫度正確直觀，密封圈由耐強(qiáng)酸堿的聚四氟乙烯材料加工制成，溫度可在室溫～500℃任意調(diào)節(jié)，同時可消化四、八、十四、二十、四十個試樣。在不需要通風(fēng)櫥的條件下消化管內(nèi)溢出的SO2等有害氣體，全部通過毒氣罩，經(jīng)過抽氣泵溶于水中排入下水道；詳情見消化裝置說明書。

【實驗/設(shè)備條件】

【樣品提取】

蛋白質(zhì)換算系數(shù)表（GB5009.5-2016）

【實驗/操作方法】

使用說明

1.  儀器和用具

1.1  分析天平：感量0.0001g

1.2  實驗室用粉碎機(jī)或研缽

1.3  酸式滴定管：25ml或10ml

1.4  錐形瓶：容積250ml或300ml

1.5  分樣篩：孔徑0.45mm(40目)

2.  試劑

2.1  鹽酸（HCl）：分析純（GB/T622-2006）0.05moI/L標(biāo)準(zhǔn)液，（4.2ml鹽酸，注入1000ml蒸餾水）碳酸鈉法標(biāo)定鹽酸。

2.2  氫氧化鈉（NaOH）：分析純（GB/T629-1997），40g溶于蒸餾水中溶成100ml，配成40%水溶液（m/V）。

2.3  硼酸（H3BO3）：分析純（GB/T628-2011）2g，溶于蒸餾中水配成100ml 2%水溶液（m/V）。

2.4  混合指示劑：溶液Ⅰ：準(zhǔn)確稱取0.1g溴甲酚綠（C21H14Br4O5S）（HG/T4017-2008），溶于95%乙醇，用95%乙醇稀釋至100 ml。

溶液Ⅱ：準(zhǔn)確稱取0.2g甲基紅（C15H15N3O2）（HG/T3449-2012），溶于95%乙醇，用95%乙醇稀釋至100 ml。

取30 ml溶液Ⅰ、10 ml溶液Ⅱ，混勻即可。陰涼處保存（保存期三個月以內(nèi)）。

2.5  硫酸銅（CuSO4·5H2O）分析純（GB/T665-2007）10g；硫酸鉀（K2SO4）（GB/T16496-1996）分析純150g，在研缽中研磨，仔細(xì)混勻過40目篩（催化劑）。

2.6  濃硫酸(H2SO4)化學(xué)純（GB/T625-2007）（含量98%、無氮）。

2.7  蒸餾水：為實驗室用三級水、電導(dǎo)率（25℃，ms/m）≤0.50，電阻率（25℃，MΩ·cm）≥0.2。

3.  樣品制備

3.1  選取有代表性的樣品，挑揀干凈，按四分法縮減取樣，粉碎至40目篩通過，裝于密封容器中。（取樣不少于200g）

3.2  液體試樣，必須有代表性，取樣后，先放在消化管內(nèi)濃縮至體積（三分之一）再加入催化劑及硫酸進(jìn)行消化。

4.  操作步驟

4.1  消化操作：詳細(xì)步驟見消化裝置說明書

4.2  蒸餾：

4.2.1  蒸餾前準(zhǔn)備

 安裝儀器，具體步驟如下所示：

a.將進(jìn)水管的一頭擰到冷凝水進(jìn)水口，另外一頭擰到自來水龍頭上。出水口和排水閥分別用黑色膠管連接，另一頭放入下水道即可。

b.接通電源

注意：接通電源時，必須關(guān)閉總電源開關(guān)、蒸汽開關(guān)、堿開關(guān)

注意：溶液桶桶口放置位置需低于儀器工作臺臺面，務(wù)必將溶液桶放置在地上。

4.2.2  蒸餾操作

a.  打開水龍頭，使自來水進(jìn)入冷凝管進(jìn)水口膠管。（注意水流量以保證冷凝管起到冷卻作用為止）

b.  開總電源開關(guān)(19)，待水位指示燈(6)亮，開蒸汽開關(guān)（9）直至蒸汽導(dǎo)出管（2）放出蒸汽，關(guān)蒸汽開關(guān)（9）。

c.  在蒸餾接收管托架上，放上已經(jīng)加入適量（15ml左右）的接收液（硼酸和混合指示劑）的錐形瓶，使蒸餾接收管的末端浸入接收液內(nèi)。

d. 在消化完全冷卻后的消化管內(nèi)，逐個加10ml左右蒸餾水稀釋樣品，如微量蒸餾，先將消化液移至定容瓶內(nèi)定容，然后按需移液至消化管內(nèi)。

e．提起左側(cè)消化管抬架升降柄（5），將消化完全冷卻后的消化管套在防濺管密封圈(3)上，稍加旋轉(zhuǎn)使其保持接口密封，拉下防護(hù)罩。

f. 加堿：開堿開關(guān)（8），加入適量NaOH溶液至蒸餾液顏色變棕褐色為止，關(guān)堿開關(guān)（8）。(注意：如儀器連續(xù)數(shù)天停止使用，必須先吸空膠管和堿泵內(nèi)的堿液，然后用10﹪的鹽酸或硼酸溶液過濾膠管和堿泵，再用蒸餾水過濾一次即可)。

g. 開蒸汽開關(guān)（9），節(jié)水閥自動開啟，自來水進(jìn)入冷凝管循環(huán)管路，開始蒸餾，直至氨氣全部蒸出（全量蒸餾接收液體積約為150ml；微量蒸餾接收液體積約為100ml）。先將接收瓶取下，取洗瓶（蒸餾水）沖洗接收管。再關(guān)蒸汽開關(guān)（9）。

4.3  滴定：

4.4  吸收氨后的接收液，用標(biāo)定后的鹽酸溶液進(jìn)行滴定，溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榛易仙珵榻K點。

4.5  空白測定：用0.1g糖代替樣品或不加樣品作空白測定。

4.6  測定結(jié)果計算：

4.6.1 測定計算公式：

式中：V2 —滴定試樣時消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（ml）

V1 —滴定空白時消耗酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（ml）

V —試樣分解液總體積（ml）

V′—試樣分解液蒸餾用體積（ml）

      C  —酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的mol/L濃度

      K  —氮換算成粗蛋白質(zhì)的系數(shù)

W  —試樣重量（g）

      0.0140—氮的毫克當(dāng)量數(shù)

4.6.2  平行測定的結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留小數(shù)點后二位。

4.6.3  結(jié)果報告中必須注明氮換算成粗蛋白質(zhì)的系數(shù)。換算系數(shù)見下表。

【實驗結(jié)果/結(jié)論】

【儀器/耗材清單】

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