細(xì)胞傳代培養(yǎng) 一原理 細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng)，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)） 傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶 二材料和試劑 1細(xì)胞：貼壁細(xì)胞株 2試劑：0.25％胰酶1640培養(yǎng)基（含10％小牛血清） 3儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱培養(yǎng)瓶吸管廢液缸等 三操作步驟 1將長(zhǎng)滿(mǎn)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去 2加入0.51ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中 3瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀(guān)察細(xì)胞隨著時(shí)間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時(shí)將胰酶棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化 觀(guān)察消化也可以用肉眼，當(dāng)見(jiàn)到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)終止消化一般室溫消化時(shí)間約為13分鐘 4用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37下繼續(xù)培養(yǎng)第二天觀(guān)察貼壁生長(zhǎng)情況