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一 技術(shù)簡介
活體生物熒光成像技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一項分子基因表達(dá)的分析檢測系統(tǒng)它由敏感的CCD及其分析軟件和作為報告子的熒光素酶以及熒光素組成利用靈敏的檢測方法,讓研究人員能夠直接監(jiān)控活體生物體內(nèi)腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移感染性疾病發(fā)展過程特定基因的表達(dá)等生物學(xué)過程傳統(tǒng)的動物實驗方法需要在不同的時間點宰殺實驗動物以獲得數(shù)據(jù),得到多個時間點的實驗結(jié)果相比之下,可見光體內(nèi)成像通過對同一組實驗對象在不同時間點進(jìn)行記錄,跟蹤同一觀察目標(biāo)(標(biāo)記細(xì)胞及基因)的移動及變化,所得的數(shù)據(jù)更加真實可信因其操作極其簡單所得結(jié)果直觀靈敏度高等特點,在剛剛發(fā)展起來的幾年時間內(nèi),已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)醫(yī)學(xué)研究及藥物開發(fā)等方面
二原理
活體生物熒光成像技術(shù)是指在小的哺乳動物體內(nèi)利用報告基因-熒光素酶基因表達(dá)所產(chǎn)生的熒光素酶蛋白與其小分子底物熒光素在氧Mg2+離子存在的條件下消耗ATP發(fā)生氧化反應(yīng),將部分化學(xué)能轉(zhuǎn)變?yōu)榭梢姽饽茚尫湃缓笤隗w外利用敏感的CCD設(shè)備形成圖像熒光素酶基因可以被插入多種基因的啟動子(promoter),成為某種基因的報告基因,通過監(jiān)測報告基因從而實現(xiàn)對目標(biāo)基因的監(jiān)測
生物熒光實質(zhì)是一種化學(xué)熒光,螢火蟲熒光素酶在氧化其特有底物熒光素的過程中可以釋放波長廣泛的可見光光子,其平均波長為560nm(460~630nm),這其中包括重要的波長超過600nm的紅光成分在哺乳動物體內(nèi)血紅蛋白是吸收可見光的主要成分,能吸收中藍(lán)綠光波段的大部分可見光;水和脂質(zhì)主要吸收紅外線,但其均對波長為590~800nm的紅光至近紅外線吸收能力較差,因此波長超過600nm的紅光雖然有部分散射消耗但大部分可以穿透哺乳動物組織被敏感的CCD camera檢測到 熒光成像冷CCD相機 500萬彩色CCD制冷顯微相機 冷CCD
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