穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建

原理：

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，就是轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上，使宿主細(xì)胞可

長(zhǎng)期表達(dá)目的基因及蛋白。需要在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染基礎(chǔ)上對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行篩選或者應(yīng)用高轉(zhuǎn)染效率的病毒，根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物進(jìn)行細(xì)胞傳代，從而得到可穩(wěn)定表達(dá)目的基因的細(xì)胞系。

應(yīng)用：

觀察目的基因及其表達(dá)蛋白在某種細(xì)胞中的功能（穩(wěn)定，可長(zhǎng)期進(jìn)行研究）

一般流程：

1） 篩選濃度測(cè)定：以10~14天細(xì)胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度

2） 細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前天接種細(xì)胞，各種細(xì)胞的平板密度依據(jù)各種細(xì)胞的生長(zhǎng)率和細(xì)胞形狀而定。進(jìn)行轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)到60%~80%覆蓋

3） 細(xì)胞轉(zhuǎn)染（病毒、脂質(zhì)體、電穿孔、FuGENE 6）

4） 利用質(zhì)粒上含有的抗性選擇進(jìn)行篩選

5） 鑒定篩選結(jié)果

前期需要準(zhǔn)備：

l 構(gòu)建好的外源基因載體

l 待轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系（1×106個(gè)細(xì)胞，可傳代，倍增時(shí)間小于48小時(shí)）以及細(xì)胞培養(yǎng)條件的說(shuō)明

l 若需要檢測(cè)靶基因的表達(dá)變化，請(qǐng)?zhí)峁┫鄳?yīng)抗體

結(jié)果呈現(xiàn)：

構(gòu)建好的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系及相關(guān)的外源基因表達(dá)分析

BTBD6BTBD6蛋白抗體

BMPERBMP內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)節(jié)蛋白抗體

HCV NS transactivated protein 8丙肝病毒NS反轉(zhuǎn)錄蛋白8抗體

BMP1骨形態(tài)發(fā)生蛋白1/膠原C蛋白肽鏈內(nèi)切酶抗體

BMP9骨形態(tài)發(fā)生蛋白9抗體

Beta tubulin cofactor D微管蛋白β輔助因子D抗體

BTR1鈣粘蛋白相關(guān)蛋白受體BTR1抗體

Bub3有絲分裂蛋白BUB3抗體

BHLHB9/p60TRPp60TRP蛋白抗體

BLMH博萊霉素水解酶抗體

Aggrecan短蛋白聚糖抗體

BTBD3BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體

BBS12巴爾得-別德?tīng)柧C合征相關(guān)蛋白12抗體