大腸桿菌（Escherichia coli，E.coli） 革蘭氏陰性短桿菌，大小0.5×1～3微米。周生鞭毛，能運(yùn)動，無芽孢。能發(fā)酵多種糖類產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，是人和動物腸道中的正常棲居菌，嬰兒出生后即隨哺乳進(jìn)入腸道，與人終身相伴，幾乎占糞便干重的1/3。下面讓小編為你介紹一下大腸桿菌的一般培養(yǎng)方法。

培養(yǎng)基準(zhǔn)備：

使用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，組成成分：瓊脂15～20g,Nacl5g,牛肉膏3g,蛋白胨10g,水1000mL,PH值7.4～7.6。

配置步驟：

1.稱藥品

計算實際用量，根據(jù)配方稱取各種藥品然后將它們放入大燒杯中，可以將牛肉膏放在小燒杯或表面皿中進(jìn)行稱量，用熱水溶解后往大燒杯里倒入。也可以將牛肉膏放在稱量紙上稱量，之后放入熱水中，使得牛肉膏與稱量紙分離，然后立即將紙片取出，蛋白胨非常容易吸潮，所以稱量時動作要快。

2.加熱溶解

將低于所需要的水量加入到燒杯中，然后將在石棉網(wǎng)上放上燒杯，用小火加熱，并且用玻棒攪拌,等到藥品完全溶解后，再往燒杯內(nèi)加水到所需要的水量。如果配制固體培養(yǎng)基,那么向已經(jīng)溶解的藥品中加入稱好的瓊脂，再加熱融化,這個過程，需要持續(xù)攪拌，避免防瓊脂糊底或溢出，Z后補(bǔ)充失掉的水分。

3.調(diào)pH

對培養(yǎng)基的pH進(jìn)行檢測，如果pH偏酸,那么可以滴加NaOHlmol/L，一邊滴加一邊攪拌,并且隨時用pH試紙對的pH進(jìn)行檢測，一直到pH在所需pH范圍為止。如果pH偏堿，那么就用1mol/LHCl進(jìn)行調(diào)節(jié)，一般在加瓊脂之前進(jìn)行pH的調(diào)節(jié)，需要注意pH值不要調(diào)過頭,避免因為回調(diào)而對培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度產(chǎn)生影響。

4.過濾

可以使用濾紙過濾液體培養(yǎng)，可以用4層紗布對固體培養(yǎng)基進(jìn)行趁熱過濾，對于觀察培養(yǎng)有好處。然而如果是供一般使用的培養(yǎng)基,那么可以省略這一步。

5.分裝

根據(jù)實驗要求，能夠通過試管或三角瓶內(nèi)對配制的培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，為了防止培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上而導(dǎo)致污染，分裝時可以使用漏斗。分裝量：固體培養(yǎng)基大約是試管高度的l/5,在滅菌后制成斜面，往三角瓶內(nèi)進(jìn)行分裝，容積不超過其的一半Z為恰當(dāng)。半固體培養(yǎng)基占試管高度的1/3比較適合。滅菌后垂直待凝。

6.加棉塞

用普通棉花(非脫脂棉)制作的棉塞塞在試管口和三角瓶口上，要選擇形狀,大小和松緊度均合適的棉塞，為了起到避免雜菌侵入和有利通氣的作用，棉塞四周要緊貼管壁,不留縫隙。棉塞總長約3/5要3/5塞入試管口或瓶口內(nèi),防止棉塞脫落。一些微生物需要更好的通氣，那么需要使用8層紗布制成通氣塞，有時候也能用試管帽或塑料塞代替棉塞。

7.包扎

為了避免滅菌時冷凝水沾濕棉塞，需要在加塞后用一層牛皮紙或雙層報紙將三角瓶的棉塞外表面包住。如果養(yǎng)基分裝于試管中，那么應(yīng)該將5支或7支放在一起，再用牛皮紙將棉塞外包住，用繩扎好，然后將培養(yǎng)基名稱,組別,日期用記號筆注明。

8.滅菌

在121.3℃濕熱滅菌上述培養(yǎng)基20min，如果由于特殊情況不能及時滅菌，那么應(yīng)該暫時存放在冰箱里。

9.無菌檢查

在37℃溫箱中培養(yǎng)24～48h滅菌的培養(yǎng)基，無菌生長立刻就能夠使用，或者將其在冰箱或清潔的櫥內(nèi)貯存?zhèn)溆谩?/span>

大腸桿菌的培養(yǎng)：

在37攝氏度條件下進(jìn)行48到72小時的恒溫培，由于不同的接種和具體培養(yǎng)條件不同，所以明顯的菌落通常均是在2天以后才會長出。乳白色，圓形，菌落邊緣整齊，表面光滑，表面和背面顏色一致是菌落的特征。