液相色譜儀是指利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進(jìn)行先分離，而后分析鑒定的儀器。液相色譜儀的基本配置有：①輸液泵;②手動進(jìn)樣閥;③色譜柱;④檢測器。

輸液泵的應(yīng)用

　　液相色譜儀輸液泵一般由入口單向閥、出口單向閥、注塞桿、泵密封圈等組成，是液相色譜儀的重要組成部分，要保持泵的良好操作規(guī)程。必須維護(hù)系統(tǒng)的清洗，保證溶劑的純度：

　　(1)用高純度的試劑和HPLC級溶劑;

　　(2)過濾流動相和溶劑;

　　(3)脫氣;

　　(4)再次使用前放空脫氣，工作結(jié)束從泵中洗去緩沖液(Z好另外清洗柱塞);

　　(5)不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中;

　　(6)定期更換泵墊圈;

　　(7)查閱有關(guān)泵的操作手冊。

手動進(jìn)樣閥的應(yīng)用

　　1、液相色譜儀正確的進(jìn)樣方式

　　(1)手動進(jìn)樣閥在INJECT位置：把取存試液的進(jìn)樣針導(dǎo)入進(jìn)樣孔，直到插入為止(必須穿過轉(zhuǎn)子密封圈聚四氯乙烯套管);

　　(2)轉(zhuǎn)動手柄到load位置：把試液放入閥體中的定量環(huán)里;

　　(3)同時轉(zhuǎn)動手柄到INJECT位置：試液進(jìn)入液路。

　　2、進(jìn)樣前樣品處理及注意事項(xiàng)

　　(1)須用專用平頭液相專用注射器進(jìn)樣(禁用氣相尖頭進(jìn)樣針);

　　(2)進(jìn)樣試液應(yīng)無顆粒、渾濁和乳化，使用前先用超聲波溶解后，須用0.45um的過濾膜過濾;

　　(3)部分裝取樣時，取樣體積一般小于定管的50%，完全裝液相取樣體積取必須是定量環(huán)的5倍以上(特別是高要求分析中外標(biāo)定量);

　　(4)如流動相使用緩沖鹽(或酸性、堿性)在使用結(jié)束時必須用蒸溜水在load和INJECT位置反復(fù)沖洗干凈，因鹽析出會損害轉(zhuǎn)子、定子密封圈。

　　3、液相色譜儀進(jìn)樣閥故障及維護(hù)

　　(1)在進(jìn)樣針與進(jìn)樣閥不相配(針外徑偏小)情況，可以用鉛筆的橡皮頭將針導(dǎo)管壓入少許，使密封環(huán)變小達(dá)到嚴(yán)格密封;

　　(2)轉(zhuǎn)子密封圈漏液的維護(hù)：

　?、俎D(zhuǎn)子密封圈少量漏液，擰松手柄六角螺釘，手柄沿軸方向送進(jìn)，使手柄里的突出部嵌入壓力調(diào)整螺釘缺口，旋轉(zhuǎn)手柄1/20圈，直到不漏液為止;

　?、谵D(zhuǎn)子密封圈損壞，通過方法①還漏液則需要更換轉(zhuǎn)子密封圈。

　　擰下三個定子螺釘，從主體上卸下轉(zhuǎn)子密封圈，用手柄擰松壓力調(diào)整螺釘半圈，安裝上三個定子螺母均等地牢牢擰緊，再來調(diào)整壓力螺絲擰到原來紅色標(biāo)記位置。

液相色譜柱的應(yīng)用

　　1、正確的使用方法

　　(1)液相色譜儀進(jìn)樣的試樣Z好稱量，超聲波溶解，樣品過濾器過濾后進(jìn)入色譜;

　　(2)在有條件情況下，Z好一個樣品使用一支色譜柱，可延長柱使用壽命;

　　(3)色譜柱在使用后必須沖洗干凈后方可保存過夜;

　　(4)對于使用酸、堿、緩沖鹽的流動相，柱子必須用蒸溜水(含5%有機(jī)溶劑)沖洗干凈，再用甲醇、乙腈沖洗保護(hù)(對反相柱)。

　　2、色譜柱的維護(hù)

　　(1)流動相所用試劑盡可能是色譜純試劑，水Z好是超純水或全玻璃雙重蒸溜水;

　　(2)流動相使用前用溶劑過濾器除去可能存在的微粒，流動相應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。對含鹽的流液尤其應(yīng)注意長時間會產(chǎn)生細(xì)菌或出現(xiàn)沉淀;

　　(3)柱子在使用過程中會產(chǎn)生：①塔板數(shù)下降;②峰形變差;③壓力增加;④保留時間變化。

　　為使液相色譜儀柱子使用壽命延長：每天使用完后必須當(dāng)天沖洗干凈;壓力增大時，可能是過濾篩板污染，可以將柱頭螺母卸下取出濾片并將其在20%的硝酸溶液里超聲波清洗約15分鐘，再用純水超聲波清洗10分鐘，重新裝入色譜柱;

　　(4)色譜柱的再生

　?、俜聪嘀謩e用甲醇：水=90：10，純甲醇，二氯甲烷做流動相依次沖洗，每次沖洗體積為柱體積的30倍，然后以相反順序沖洗;

　?、谡嘀謩e用正己烷，異丙醇，二氯甲烷，甲醇做流動相依次沖洗，每次為柱體積的30倍，甲醇沖洗完以后再以相反的次序沖洗，至正己烷。注意使用流動相必須嚴(yán)格脫水。

紫外檢測器的應(yīng)用

　　紫外檢測器是液相色譜儀應(yīng)用Z廣泛的檢測器，可測190-350mm光吸收變化，其結(jié)構(gòu)基本部件：氚燈流通值和傳感器等等。

　　1、氘燈的注意事項(xiàng)

　　(1)在開動液相色譜儀時Z好先開泵，等流入大致平衡后再開檢測器，可以縮短氘燈使用時間，沖洗關(guān)機(jī)也一樣。先關(guān)檢測器，后沖洗;

　　(2)在分析中沒有較長時間間隔，可以不關(guān)檢測器。

　　2、流通池檢測事項(xiàng)

　　(1)流通池是各分離組分經(jīng)色譜柱分離到檢測器的通道。流通池應(yīng)定期清洗檢查，定期更換池墊圈;

　　(2)流通池常見故障是產(chǎn)生氣泡，噪音較大，流動相必須嚴(yán)格脫氣，其次在液相色譜儀檢測器出口加一較長背壓管;

　　(3)不相互溶的溶劑沒有中間過渡會產(chǎn)生氣泡，以及噪音變大，故必須用異丙醇過渡后再換上新的溶劑;

　　(4)流通池本身污染程度可以在UV-254nn處檢查，樣品池和參比池的兩處的光能量結(jié)果來判斷。

　　3、氘燈的更換

　　(1)必須關(guān)閉檢測器電源，等燈基本冷卻后再操作;

　　(2)氘燈使用可以通過檢查實(shí)際使用時間和結(jié)合光能量來辦;

　　(3)氘燈更換必須戴手套，以防污染燈的表面產(chǎn)生噪聲;

　　(4)液相色譜儀燈座位置必須安裝到位。

　　4、流通池的清洗必須按照操作規(guī)程來處理

　　(1)下池入口、出口、液路路管;

　　(2)用帶金屬接頭的注射器連接池進(jìn)口端、出口端注入異丙醇;

　　(3)回抽10毫升異丙醇通過池去掉殘留流動相;

　　(4)回抽10毫升蒸溜水;

　　(5)回抽10毫升60mol/L，磷酸通過池去掉沉積物;

　　(6)回抽20毫升蒸溜水;

　　(7)用至少100毫升蒸溜水正向通過池入口。