細胞培養(yǎng)指的是在體外模擬體內(nèi)的環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），讓它生存、生長、繁殖并且能夠維持主要的結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細胞培養(yǎng)在生物學(xué)中又叫做細胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說，細胞培養(yǎng)技術(shù)可以通過一個細胞培養(yǎng)成為大量的單細胞或極少分化的多細胞，細胞培養(yǎng)技術(shù)是細胞生物學(xué)研究方法中及其重要和常見的技術(shù)，由細胞培養(yǎng)不僅能夠獲取大量細胞，還能夠借此研究細胞其他的相關(guān)知識。

一、細胞復(fù)蘇

將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化。移入15ml離心管中，加入10ml預(yù)熱的DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。加入10ml DMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM完全培養(yǎng)基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

二、細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時．去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養(yǎng)箱3min。加人1ml DMEM完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉(zhuǎn)移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經(jīng)高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進行計數(shù)，按照1×105/盤接種，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

三、細胞凍存

細胞密度達到80%～90%時，去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養(yǎng)箱3min。加入lmlDMEM完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉(zhuǎn)移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。加入lml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內(nèi)（盒內(nèi)有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入一80℃冰箱內(nèi)，過夜，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放入液氮，可以保存三個月。

凍存液的配制：70%的完全培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

設(shè)施：超凈臺、恒溫培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、液氮儲存罐、電熱鼓風(fēng)干燥箱、冰柜、電子天平、恒溫水浴槽、離心機、壓力蒸汽消毒器。

器材：

一、玻璃器材

培養(yǎng)皿、滴流瓶、刻度吸管、離心管、培養(yǎng)瓶、燒杯、量筒、三角燒瓶

二、塑料器材

多孔培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶

三、橡皮器材

橡皮制品（Z好是硅制品）做各種瓶或試管的塞子、蓋子。

四、金屬器材

剪刀、鑷子、手術(shù)刀、解剖刀、血管鉗、組織鑷、眼科鑷及各種型號針頭

五、其他物品

紗布、注射器和針頭