聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的Zda特點(diǎn)，是能將微量的DNA大幅增加。

PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)

DNA擴(kuò)增量隨著PCR的三個(gè)反應(yīng)步驟的重復(fù)循環(huán)進(jìn)行而呈指數(shù)級(jí)增長(zhǎng)。實(shí)際反應(yīng)初期，靶序列DNA片段呈指數(shù)級(jí)增加，當(dāng)PCR產(chǎn)物的逐漸積累時(shí)，被擴(kuò)增的DNA片段不再呈指數(shù)增加，此時(shí)進(jìn)入線性增長(zhǎng)期或靜止期，使得平均效率達(dá)不到理論值。

循環(huán)參數(shù)

預(yù)變性

PCR能否成功至關(guān)重要的因素為模板DNA是否完全變性與PCR酶是否完全激活。建議參考試劑說(shuō)明書來(lái)決定加熱時(shí)間，通常未修飾的Taq酶激活時(shí)間為2min。

變性步驟

通常溫度為95℃，使各種靶DNA序列完全變性所需的時(shí)間大概為半分鐘，可能的情況下可以縮短該步驟時(shí)間。若變性時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)對(duì)酶活性損害，若變性時(shí)間過(guò)短，則靶序列變性不徹底，可能導(dǎo)致擴(kuò)增失敗。

引物退火

需要從多方面來(lái)決定退火溫度，通常是以引物的Tm值為參考，按照擴(kuò)增的長(zhǎng)度對(duì)退火溫度進(jìn)行適當(dāng)?shù)南抡{(diào)。之后在此次實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上做出預(yù)估。PCR的特異性受到退火溫度的影響非常大。

引物延伸

引物延伸通常在72℃（Taq酶Z適溫度）下進(jìn)行。若退火溫度較高并且擴(kuò)增長(zhǎng)度較短，那么可以省去本步驟。

擴(kuò)增片段長(zhǎng)短決定了延伸時(shí)間，通常推薦在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生設(shè)定為1min/kbp。

循環(huán)數(shù)

大多數(shù)PCR包括25-35循環(huán)，若過(guò)多容易有非特異擴(kuò)增產(chǎn)生。

Z后延伸

在Z后一個(gè)循環(huán)后，反應(yīng)在72℃維持10-30分鐘．使引物延伸完全，并使單鏈產(chǎn)物退火成雙鏈。

臨床應(yīng)用

移植配型：

伴隨著PCR技術(shù)的出現(xiàn)，HLA配型領(lǐng)域也引入了分子生物學(xué)技術(shù)，通過(guò)PCR擴(kuò)增儀能夠使得HLA基因分型方法快速、準(zhǔn)確的建立，使臨床移植配型得到滿足。

診斷惡性腫瘤：

PCR技術(shù)不僅帶來(lái)了簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確的臨床診斷方法，而且提供了腫瘤相關(guān)疾病的ZL與預(yù)后的監(jiān)控手段。其被用來(lái)檢測(cè)腫瘤相關(guān)病毒基因以及癌基因和抑癌基因缺失與點(diǎn)突變。

診斷遺傳性疾?。?/span>

遺傳性疾病是以核酸的表達(dá)產(chǎn)物和核酸分子結(jié)構(gòu)變異為發(fā)病基礎(chǔ)的。對(duì)于這一類疾病，PCR技術(shù)正好是有效的檢測(cè)手段。

診斷感染性疾?。?/span>

在感染性疾病的診斷方面，對(duì)于一些沒(méi)有可靠和穩(wěn)定的檢測(cè)手段以及需要很長(zhǎng)周期培養(yǎng)的病原體，PCR技術(shù)特別適合使用。