定氮儀使用步驟

diyi步，加酸以及加堿量的確定

按消煮樣品時加入硫酸量計算出所需加入氫氧化鈉的量，根據(jù)消煮液中氮的大約含量計算所需加入的硼酸量。根據(jù)計算量確定加堿時間和加硼酸時間。

第二步，開啟機器

打開電源開關(guān)，顯示屏上顯示出“P”。按“轉(zhuǎn)換”鍵，硼酸狀態(tài)指示燈亮，按加好鍵或按減號鍵，設(shè)定加硼酸時間。再按“轉(zhuǎn)換”鍵，使加堿狀態(tài)指示燈亮，按加號鍵或按減號鍵，設(shè)定加堿時間。

第三步，將空的三角瓶放在托盤上，此時托盤處在高位。把裝有樣品的消煮管放在托盤上，要與上端的橡膠塞裝緊。

第四步，按“啟動”鍵，儀器開始自動向三角瓶中加硼酸，向消煮管內(nèi)加堿，然后進入蒸餾狀態(tài)，待三角瓶中冷凝液達到預(yù)定體積量時，三角瓶托盤落下，再蒸餾12s后蒸餾停止工作，發(fā)出提示聲。在蒸餾過程中吸收液逐漸變成藍綠色。若用手動蒸餾，要用pH試紙測試一下蒸餾液，根據(jù)酸堿性判斷是否蒸餾結(jié)束。若pH試紙顯中性或酸性，即說明蒸餾結(jié)束，若顯堿性，需要再繼續(xù)蒸餾直至顯中性或酸性。

第五步，取下三角瓶，用酸滴定管滴定三角瓶中的液體， 顏色由藍綠色變?yōu)榇u紅色，即到達終點。按含氮量-粗蛋白質(zhì)含量公式進行計算，取得測定結(jié)果。

定氮儀使用的注意事項

(1)樣品前處理注意事項

樣品應(yīng)盡量選取具有代表性的，大塊的固體樣品應(yīng)用粉碎設(shè)備打得細小均勻，

液體樣要混合均勻。

(2)模塊化消解裝置消化樣品注意事項

消化過程中，首先確保濃硫酸量足夠，如樣品脂肪含量較高時，應(yīng)適當增加硫酸量；其次對某些樣品炭化易產(chǎn)生泡沫，這時可采用消解爐曲線升溫或手動控制升溫，讓消解溶液沸騰均勻后再提高消解溫度，直至消化液呈透明藍綠色再消化0.5h或1h。因為炭化過程中，升溫速度過快會使樣品溢出消化管或濺起粘 附在管壁導(dǎo)致無法消化完全而造成氮損失，影響結(jié)果準確性。

(3)上機測定注意事項

儀器稀釋水采用中性去離子水；蒸汽發(fā)生瓶內(nèi)的水必須保持酸性；硼酸吸收液配制時應(yīng)用中性去離子水，避免堿性物質(zhì)的混入，盛裝硼酸吸收液的容器應(yīng)刷洗干凈；堿液應(yīng)用中性去離子水配置；滴定用的標準酸必須按照標準配制和標定。

上機測試樣品前，應(yīng)打開儀器預(yù)熱，放一支消化管空蒸一次，排除蒸餾管路中的空氣。

蒸餾時必須加堿，加入堿的作用一是中和硫酸，二是使溶液處于強堿性，這樣才能使(NH4)2SO4變成NH3被硼酸吸收，通常是消化取用濃硫酸的四倍體積(40%NaOH)。硫酸銅可作為催化劑，并在蒸餾時作堿性反應(yīng)指示劑，氫氧化鈉是否足量?？山柚蛩徙~在堿性條件下生成的褐色沉淀或深藍色的銅氨絡(luò)離子指示。若溶液的顏色不改變，則說明所加的堿液不足。

蒸餾是否完全，半自動定氮儀可用精密pH試紙測冷凝管的冷凝液來確定，中性說明已蒸餾完全。全自動定氮儀目前主要是以蒸餾體積與設(shè)置時間(經(jīng)驗值)確保蒸餾完全。

蒸餾結(jié)束后，滴定主要是是分為人工滴定和機器自動滴定計算和打印實驗結(jié)果。要求操作者根據(jù)實際情況，按照要求操作。

(4)其它注意事項

1.若設(shè)定的加硼酸時間或加堿時間為零秒鐘，則自動 工作過程完成后顯示窗顯示“E”不閃動，發(fā)出“嘀”聲約2s提示音。

2.若按下“啟動”鍵后，三角瓶托盤仍處于下端，顯示窗顯示自下而上閃動的“-”符號，并發(fā)出“嘀-嘀-嘀”的提示音，提示應(yīng)放空三角瓶在托盤上，使托盤升起。

3.混合指示劑在堿性溶液中呈綠色，在中性溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。

4.氨是否完全蒸餾出來，可用pH試紙測試餾出液是否為堿性。

5.向蒸餾瓶中加入濃堿時，往往出現(xiàn)褐色沉淀物，這是由于分解促進堿與加入的硫酸銅反應(yīng)生成氧化亞銅沉淀。

6.儀器應(yīng)避免安裝在陽光直射及過冷、過熱或潮濕的地方，室內(nèi)溫度不得超過10℃—30℃，通風(fēng)要好，應(yīng)有良好的散熱條件。

7.儀器前部槽皿中若積有液體，應(yīng)經(jīng)常擦凈。

8.長期使用后，在加熱器上會結(jié)有水垢，它將影響 加熱效率。若水垢過厚，在關(guān)機狀態(tài)下斷電，可將蒸汽發(fā)生器頂上的一個旋塞擰下，在管口處插入一個小漏斗，注入除垢劑或冰醋酸清洗水垢(也可用稀釋后的硫酸)。清洗后，打開機箱內(nèi)蒸汽發(fā)生器排水節(jié)門將水排凈，并加入清水多次清洗。

定氮儀使用需要考慮的幾個問題：

1.樣品在蒸餾裝置中反復(fù)翻滾，對操作者構(gòu)成危險么?

傳統(tǒng)的定氮儀裝置，可能會對實驗人員存在潛在的危險。定氮儀蒸餾器就不會，它充分考慮了安全問題，在設(shè)計時增加了安全門裝置，保證了實驗人員的人生安全。同時，凱式定氮儀的劇烈翻滾，是因為水蒸氣大量進入到消化管，此時凱式定氮儀有自身的超壓保護裝置，可以保持內(nèi)部常壓，不會對操作人員造成傷害。

2.對蒸餾裝置中添加的水，有什么要求?

定氮儀的蒸餾水桶中裝的水，要求是蒸餾水或者純水，而且如果長時間地不用凱式定氮儀，Z好把蒸餾器中的水放掉。

3.定氮儀開機蒸餾器內(nèi)不加水怎么解決?

開機半分鐘中檢查蒸餾水桶是否漏氣，能被氣充鼓是正常;檢查蒸餾水桶內(nèi)水位是否超過三分之一，不夠補齊。

4.樣品在消化爐時，可否對消化爐進行強火加熱?

樣品消化時，不能用強火。如果樣品的糖分或者脂肪含量很高，那么我們一定要注意控制溫度，以免大量泡沫噴出凱式燒瓶，造成人員的危險，同時測定結(jié)果也會受到一定的影響。消化爐，有水浴鍋加熱和電熱板加熱。水浴鍋加熱的Zda好處是受熱均勻。

5.凱氏燒瓶的容量對實驗會有影響么?

Z適宜多少容量的凱氏燒瓶，能夠大大提升實驗速率。一般我們選擇800或者1000ml的，容量大的，能夠縮短氨化時間，另外加熱均勻性和氨化效率都比較好。在添加樣品時，盡量不要將樣品粘附在瓶頸上，以免影響實驗結(jié)果。

6.消化爐在進行樣品消化時，我們選擇水浴鍋加熱還是用電熱板?

一般我們采用水浴鍋加熱的方式。水浴鍋加熱均勻，溫度上升穩(wěn)定，大大提高消化效率，以及人身安全。

定氮儀使用的優(yōu)缺點：

凱氏定氮法的主要優(yōu)點是按照凱氏定氮原理設(shè)計的定氮儀運用化學(xué)、物理學(xué)、電學(xué)、自動控制等方面新技術(shù)采用可以批量處理樣品，簡單易于操作，對食品、農(nóng)作物、肥料、土壤、水等物質(zhì)中的氮、蛋白質(zhì)含量進行定量測定，其結(jié)果精確可靠，且能夠滿足高通量檢測要求，基本能夠客觀的反映出樣品含蛋白質(zhì)水平。同時還可以應(yīng)用于揮發(fā)性鹽基氮，二氧化硫燈物質(zhì)的測定，應(yīng)用范圍廣。

凱氏定氮法的主要缺陷是方法的特征性差，得到的測量結(jié)果只能代表樣品中所有含氮化合物的總量，不能準確表示蛋白質(zhì)的含量，這是因為在消化過程中除蛋白質(zhì)中的氮轉(zhuǎn)化成(NH4)2SO4外，一些非蛋白質(zhì)類的含氮化合物(如生物堿、尿素、三聚氰胺等)也能轉(zhuǎn)化成(NH4)2SO4，計算氮的含量時，認為所有的氮都來源于蛋白質(zhì)，因此測定結(jié)果比實際值偏高，所以定氮儀也存在此問題。

因此，使用凱氏定氮法這一技術(shù)的前提便是：樣品是真正的蛋白質(zhì)樣品，沒有被造假。參照此前提，技術(shù)便能準確為人服務(wù)。

隨著社會的進步，科學(xué)技術(shù)的發(fā)展。國內(nèi)的分析儀器行業(yè)，也開始蓬勃發(fā)展起來，以前我國僅能生產(chǎn)半自動型，且技術(shù)含量低，可靠性差，水平落后，自動定氮儀只能依賴進口，并且價格昂貴。如今，我們已經(jīng)生產(chǎn)出半自動，全自動定氮儀、肥料定氮儀。全自動定氮儀的技術(shù)含量Zgao，滴定系統(tǒng)采用官的方批準的顏色法滴定系統(tǒng)(AOAC, EPA, DIN, ISO,GB等明文規(guī)定)，柱塞泵采用高精度直線步進電機推進保證結(jié)果準確性。

綜上所述，隨著科技的進步，科研人員的努力，定氮儀已邁上一個新的臺階，并在食品中蛋白質(zhì)的測定中定為國家標準方法(GB50095-2010食品中蛋白質(zhì)的測定);而其它一些改進法有待進一步接受實踐檢驗和完善。在保證準確度的前提下，定氮儀的改進向簡便、gao效、系統(tǒng)化、自動化、智能化等方向迅猛發(fā)展，以滿足各行業(yè)的不同需求。