暗視野顯微鏡又叫暗場顯微鏡，是一種通過觀察樣品受側(cè)向光照射時所產(chǎn)生的散射光來分辨樣品細(xì)節(jié)的特殊顯微鏡。暗視野顯微鏡和明場不同，不直接觀察到照明的光線，而觀察到的是被檢物體反射或衍射擊光線。因此，視場成為黑暗的背景，被檢物體則呈現(xiàn)明亮的象。

暗視野顯微鏡的原理

　　1、丁達(dá)爾現(xiàn)象

　　光通過渾濁媒質(zhì)(煙、霧、懸浮液和乳狀液等)時，渾濁介質(zhì)所呈現(xiàn)的光的強(qiáng)烈的散射現(xiàn)象。暗視野顯微鏡是以丁達(dá)爾效應(yīng)為基礎(chǔ)，即以膠體粒子的反射和散射現(xiàn)象為基礎(chǔ)而設(shè)計的。

　　2、暗視野顯微鏡的工作原理

　　暗視野顯微鏡應(yīng)用丁達(dá)爾現(xiàn)象，使用特殊的聚光器，照明光線不能直接入射到物鏡之內(nèi)，使入射光線經(jīng)聚光器斜向照明被檢樣品，利用樣品表面的散射光和反射光進(jìn)行觀察。暗視野顯微鏡視野內(nèi)所看到的圖像不是透過樣品的直射光線形成的，而是由被檢樣品表面所散射和反射的光形成的，所以暗視野中看到的是被檢樣品的衍射光圖像，非物體本身。暗視野照明法是斜射照明法的一種。

　　3、暗視野顯微鏡的優(yōu)點

　　暗視野顯微鏡具有對微小物體的分辨能力，對大小在0.004μm以上的微小粒子，雖然看不清楚樣品的細(xì)微結(jié)構(gòu)，亦可清晰地分辨其存在和運(yùn)動。

　　4、暗視野顯微鏡的缺點

　　由于暗視野顯微鏡是利用被檢樣品表面散射的光層而觀察物體的，所以，在黑暗的視場中只能看到被檢樣品的存在與運(yùn)動，但不能辯清樣品內(nèi)部的細(xì)微結(jié)構(gòu)。

暗視野顯微鏡的結(jié)構(gòu)

　　暗視野顯微鏡和一般的明視野顯微鏡區(qū)別在于二者的聚光器不同，暗視野顯微鏡裝有一個ZY遮暗的聚光器，使光線不能通過聚光器，而只能從聚光器四周邊及未遮暗的部位斜射到載玻片的標(biāo)本上。因光線是斜射的，不能進(jìn)入物鏡，故觀察的視野是暗的，而聚光器斜射到菌體上的光線，因光散射作用而使菌體發(fā)出亮光，反射到物鏡內(nèi)，這樣在顯微鏡中可見到暗視野中明亮的物像。暗視野顯微鏡主要用于檢查未染色標(biāo)本的形態(tài)和運(yùn)動能力。

暗視野顯微鏡的特點

　　暗視野顯微鏡常用來觀察未染色的透明樣品。這些樣品因為具有和周圍環(huán)境相似的折射率，不易在一般明視野之下看的清楚，于是利用暗視野提高樣品本身與背景之間的對比。

　　暗視野顯微鏡能見到小至4~200nm的微粒子，只能看到物體的存在、運(yùn)動和表面特征，不能辨清物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)。暗視野顯微鏡在普通的光學(xué)顯微鏡上換裝暗視野聚光鏡后，由于該聚光器內(nèi)部拋物面結(jié)構(gòu)的遮擋，照射在待檢物體表面的光線不能直接進(jìn)入物鏡和目鏡，僅散射光能通過，因而視野是黑暗的。

　　暗視野顯微鏡由于不將透明光射入直接觀察系統(tǒng)，無物體時，視野暗黑，不可能觀察到任何物體;當(dāng)有物體時，以物體衍射回的光與散射光等在暗的背景中明亮可見。在暗視野觀察物體，照明光大部分被折回，由于物體(標(biāo)本)所在的位置結(jié)構(gòu)，厚度不同，光的散射性，折光等都有很大的變化。

　　普通顯微鏡下可以看到0.45um的細(xì)節(jié)，而暗視野顯微鏡下竟能看到0.2-0.004um的極徽小物體。這個范圍的物體叫亞粒子，因此暗視野顯微鏡也可以稱裂隙限外顯微鏡。暗視野顯微鏡特別適用于膠體化學(xué)領(lǐng)域中觀察溶質(zhì)粒子的布朗運(yùn)動，適用于觀察原蟲、細(xì)菌的鞭毛、偽足運(yùn)動，醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)范圍適用于觀察人體體液中螺旋體、尿管形、結(jié)晶或各種粒子。在這一點上，暗視野顯微鏡遠(yuǎn)比其他種類顯微鏡要優(yōu)越得多。

暗視野顯微鏡的用途

　　暗視野顯微鏡檢查是一種檢查梅毒螺旋體的方法。暗視野，顧名思義即是顯微鏡下沒有明亮的光線，它便于檢查蒼白的螺旋體。這是一種病原體檢查，對早期梅毒的診斷有十分重要的意義。

　　早期皮膚粘膜損害可查到蒼白螺旋體。一期梅毒蒼白螺旋體多在硬下疳的硬結(jié)、潰瘍的分泌物和滲出液中存在，腫大的淋巴結(jié)穿刺也可檢出。二期梅毒蒼白螺旋體可在全身血液和組織中檢出，但以皮膚檢出率Zgao。早期先天性梅毒，可以通過皮膚或粘膜損害處刮片發(fā)現(xiàn)梅毒蒼白螺旋體。Z近，通過羊膜穿刺術(shù)獲得孕婦的羊水，以其作暗視野顯微鏡觀察，對先天性梅毒有診斷價值。

　　暗視野顯微鏡適用于在普通顯微鏡下看不見的微小活體，不染色生物體樣品標(biāo)本，觀察其形狀和輪廓。廣泛適用于科研、教學(xué)、YL、防疫和農(nóng)牧等行業(yè)。