核酸提取儀是應用配套的核酸提取試劑來使得樣本核酸提取工作自動完成的儀器。其在環(huán)境微生物檢測、食品安全檢測、輸血安全、法醫(yī)學鑒定、疾病控制ZX、臨床疾病診斷、生物學研究以及畜牧業(yè)等多種領域得到廣泛地應用。下面就讓小編為你介紹一下破裂解法。

破裂解法原理

離心柱型質粒DNA提取試劑盒采用改進的SDS-堿裂解法將使細胞裂解，離心吸附柱內的硅基質膜，在低PH值、高鹽的狀態(tài)下對溶液中質粒DNA選擇性地結合，再利用漂洗液去除雜質以及其他細菌成分，Z后利用高PH值、低鹽從硅基質膜上洗脫掉純凈質粒DNA。

實驗準備

1.器材

凝膠成像系統(tǒng)、電泳設備、電子天平、馬克筆、定時器、移液器、漩渦混合儀、臺式高速離心機、微波爐、錐形瓶、試劑瓶、量筒等。

2.耗材

一次性手套、各規(guī)格Tip、無菌2毫升或者1.5毫升EP管。

3.試劑

TAE電泳緩沖液、抗生素、LB培養(yǎng)基、質粒小提試劑盒（離心柱型、YRBIO）、瓊脂糖、DNA Loading Buffer、GoldView核酸染料。

4.材料

對數期菌株

試劑配方

Ⅰ液：25mM Tris-HCL(pH 8.0)、10mM EDTA(pH 8.0)

Ⅱ液：0.2 M NaOH、1％SDS

Ⅲ液：3 M KAc（pH 4.2）

RNase A:10  μg/ml RNase A

洗脫液EB：10mM Tris-HCL(pH 8.0)、1mM EDTA(pH 8.0)

質粒DNA提取實驗流程

對數期菌體-Ⅰ液充分重懸-Ⅱ液裂解-Ⅲ液中和-離心-上清液-過柱-離心洗滌-干燥溶解-質粒DNA溶液

質粒DNA提取常見問題

1.量少

（1）嚴謹型質粒（2）菌株老化（3）裂解不完全（4）菌體量少（5）凝膠存在問題（6）菌體重懸不徹底

2.質粒斷裂

（1）裂解時動作太劇烈（2）Ⅱ液裂解耗時過長

3.RNA殘留

（1）酶的量不足 （2）RNase A被忘記加入（3）Ⅰ液中RNase A失效