酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA) 即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測(cè)大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。

一、競(jìng)爭(zhēng)法

主要用來對(duì)小分子抗原進(jìn)行測(cè)定，酶標(biāo)抗原和受檢抗原相互競(jìng)爭(zhēng)來結(jié)合固相抗體，所以和固相的酶標(biāo)抗原結(jié)合的量和與受檢抗原結(jié)合的量成反相關(guān)。

操作步驟

1，連接固相載體和特異性抗體，使得固相抗體形成，洗滌。

2.將一定量酶標(biāo)抗原和受檢標(biāo)本的混合液加入到待測(cè)管中，讓其和固相抗體反應(yīng)。如果沒有抗原在受檢標(biāo)本中，那么酶標(biāo)抗原可以順暢地結(jié)合固相抗體。如果有抗原在受檢標(biāo)本中，那么受檢標(biāo)本中的抗原和酶標(biāo)抗原一樣有機(jī)會(huì)結(jié)合固體抗體，將酶標(biāo)抗原和固體載體結(jié)合的機(jī)會(huì)競(jìng)爭(zhēng)性地占去一部分，從而減少了酶標(biāo)抗原和固相載體的結(jié)合的量。僅將酶標(biāo)抗原加入到參考管中，保溫后，和固相抗體結(jié)合的酶標(biāo)抗原的量達(dá)到Z充分，洗滌。

二、雙抗體夾心法

檢測(cè)抗原Z常用的方法，即是雙抗體夾心法，對(duì)于包含至少2個(gè)抗原決定簇的多價(jià)抗原的檢測(cè)很適用。

基本步驟

1.連接特異性抗體和固相載體，使得固相抗體形成，通過洗滌，將沒有結(jié)合的抗體和雜質(zhì)去除。

2.將受檢標(biāo)本加入，讓其和固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間，結(jié)合固相載體上的抗體和標(biāo)本中的抗原，使固相抗原復(fù)合物形成，通過洗滌，將其他沒有結(jié)合的物質(zhì)去除。

3.將酶標(biāo)抗體加入，結(jié)合酶標(biāo)抗體和固相免疫復(fù)合物上的抗原。將沒有結(jié)合的酶標(biāo)抗體徹底洗滌。此刻，固相載體上的酶的量和標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成正比。

4.將底物加入，底物在夾心式復(fù)合物中的酶的催化作用下變成有色產(chǎn)物。該抗原按照顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行定性定量分析。

三、雙位點(diǎn)一步法

在使用雙抗體夾心法對(duì)抗原進(jìn)行測(cè)定時(shí)，若將抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體當(dāng)作酶標(biāo)抗體和固相抗體，那么在測(cè)定的時(shí)候能夠并酶標(biāo)抗體的加入和標(biāo)本抗體的加入兩步為一步，雙位點(diǎn)一步法不僅使操作得到簡(jiǎn)化，使反應(yīng)時(shí)間變得更短，而且更加顯著地提高了測(cè)定的特異性和敏感性。