對特定的DNA片段起到放大擴(kuò)增作用的一種分子生物學(xué)技術(shù)，被稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。其可以被當(dāng)作生物體外的特殊DNA復(fù)制，能夠大幅增加微量的DNA。1971年Khorana首先提出設(shè)想，1985年Mullis發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)。下面就讓小編帶你了解一下PCR反應(yīng)假陽性的原因和對策。

出現(xiàn)的PCR擴(kuò)增條帶和目的靶序列條帶相同，甚至有更高的亮點(diǎn)，也更加的整齊。

引物設(shè)計不合適：

選擇的擴(kuò)增序列和非目的擴(kuò)增序列有同源性，，所以當(dāng)進(jìn)行PCR擴(kuò)增時，擴(kuò)增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。容易出現(xiàn)假陽性很有可能是因?yàn)橐锾袒蛘甙行蛄刑?，需要對引物重新設(shè)計。

靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染：

有兩種導(dǎo)致這種污染的原因

1.原因：整個基因組或大片段的交叉污染，導(dǎo)致假陽性。

解決方案：在操作的時候應(yīng)該小心輕柔，避免靶序列從離心管

濺出或者被加樣槍吸入其中。對除了不能耐高溫的物質(zhì)以及酶以外，對于任何試劑或器材都應(yīng)該高壓消毒，所用所用離心管及樣進(jìn)槍頭等都只能夠使用一次。如果有必要，在對標(biāo)本進(jìn)行添加之前，需用紫外線對反應(yīng)管和試劑進(jìn)行照射，從而對存在的核酸進(jìn)行破壞。

2.原因：空氣中的小片段核酸污染，和靶序列相比較，這些小片段更加的短，然而具有一定的同源性。，能夠互相拼接，與引物互補(bǔ)后，可擴(kuò)增出PCR產(chǎn)物，從而造成產(chǎn)生假陽性。

解決方案：可用巢式PCR方法來減輕或消除。

出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增帶

和預(yù)計的不相同，PCR擴(kuò)增后出現(xiàn)的條帶不是更大就是更小，或者非特異性擴(kuò)增帶和特異性擴(kuò)增帶同時出現(xiàn)。

原因：

1.引物與靶序列不完全互補(bǔ)或者物聚合形成二聚體。

2.出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增帶因素很多，PCR循環(huán)次數(shù)過多有、Mg2+離子濃度過高以及退火溫度過低都有可能導(dǎo)致出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增帶。其次是酶的質(zhì)和量，往往一些來源的酶不會出現(xiàn)非特異條帶，而另外一來源的酶則則很容易出現(xiàn)。當(dāng)酶量過多的時候，也有可能會有非特異性擴(kuò)增

對策：

有必要對引物進(jìn)行重新的設(shè)計。對酶的來源進(jìn)行調(diào)換或者對酶量進(jìn)行降低。對引物量進(jìn)行降低，對模板量進(jìn)行適當(dāng)增加，對循環(huán)次數(shù)進(jìn)行減少。對二溫度點(diǎn)法（93℃變性，65℃左右退火與延伸）進(jìn)行使用或者對退火溫度進(jìn)行提高。

出現(xiàn)片狀拖帶或涂抹帶

PCR擴(kuò)增的時候，有時也會有涂抹帶或片狀帶或地毯樣帶出現(xiàn)。

原因：

導(dǎo)致這種現(xiàn)象的原因有很多，比如過多的循環(huán)次數(shù)，過低的退火溫度，過高的Mg2+濃度，過高的dNTP濃度，退火時酶量過多或酶的質(zhì)量差，過高的g2+或者dNTP濃度。

對策：

1.使用其他來源的酶或者對酶的量進(jìn)行減少。

2.對循環(huán)次數(shù)減少，對模板量增加，對Mg2+濃 度和dNTP的濃度適當(dāng)?shù)慕档汀?/span>