聚合酶鏈式反應(yīng)是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù),它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制,PCR的Zda特點,是能將微量的DNA大幅增加。以下是PCR的類型,下面就讓小編帶你了解一下吧。
1.reverse PCR
兩個引物之外的DNA片段是由反向的互補引物來擴增的,擴增某個已知DNA片段兩邊的未知序列。
在擴增未知序列之后,可以對其分析,例如可以對連接已知DNA片段的序列進行探索。被用來克隆只知道部分序列的全長cDNA,對基因文庫的插入DNA進行擴增。對基因組文庫進行建立。

2.不對稱 PCR
目的:擴增使得特異長度的單鏈DNA產(chǎn)生。
方法:采用限制性與非限制性兩種不同濃度的引物,0.01:0.5微米是它們的Z佳比例。限制性引物的量是關(guān)鍵。
用途:
(1)研究基因組DNA結(jié)構(gòu)功能
(2)核酸序列測定的模板的制備
(3)雜交探針的制備
3.多重 PCR
在一個反應(yīng)體系中,對兩個以上的引物進行使用的PCR,被叫做多重PCR。多個PCR產(chǎn)物的產(chǎn)生是它的結(jié)果。其被用來對特定基因序列的存在或缺失進行檢測。
4.real-time PCR
該技術(shù)的定量功能是通過在傳統(tǒng)PCR的基礎(chǔ)上將熒光標(biāo)記探針加入來實現(xiàn)的,在PCR擴增過程中,每一輪循環(huán)產(chǎn)物的累積熒光值是通過特定設(shè)計的PCR儀器來檢測的,從而能夠?qū)δ0宓钠鹗紳舛冗M行很好的推算。
探針設(shè)計的要求:
(1)和引物與模版結(jié)合的穩(wěn)定程度相比,探針與模板結(jié)合的穩(wěn)定程度要更加的高,所以探針的Tm值至少要高于引物的Tm值5攝氏度。
(2)防止和引物發(fā)生重疊或者雜交。
(3)GC堿基的含量應(yīng)當(dāng)在40%-60%,防止單核苷酸序列的重復(fù)。
(4)探針的長度應(yīng)當(dāng)在20-40個堿基之間,從而使結(jié)合特異性得到保證。
除此之外,實驗的結(jié)果會受到探針和引物的距離或者探針的濃度或者探針與模板序列的同源性的影響。
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