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核酸提取儀CTAB法

更新時(shí)間:2025-10-23 01:43:45 類型: 閱讀量:2126
導(dǎo)讀:CTAB法是提取DNA主要的方法,其他方法還有生物方式:酶法,化學(xué)方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法,物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。

CTAB法是提取DNA主要的方法,其他方法還有生物方式:酶法,化學(xué)方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法,物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。


分類

細(xì)胞器DNA、細(xì)胞核DNA。

單鏈環(huán)狀、雙鏈線性、雙鏈環(huán)狀。

組織DNA、細(xì)胞懸液DNA、、病毒DNA、質(zhì)粒DNA、真核生物DNA、細(xì)菌DNA。


提取原則

1.應(yīng)當(dāng)將如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子等其他生物大分子的污染應(yīng)降低到Zdi程度。

2.應(yīng)當(dāng)盡可能去除如RNA的其他核酸分子。

3.使核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性得以保證。

4.不應(yīng)當(dāng)有對(duì)酶有YZ作用的有機(jī)溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子存在于核酸樣品中。


3.jpg

提取方法

1.表面活性劑快速制備法

使用Triton X-100A或NP40表面活性劑對(duì)細(xì)胞破碎,然后使用蛋白酶K或酚將蛋白去除,使用乙醇沉淀或透析。


2.加熱法快速制備

溫度96℃-100℃加熱5min,之后離心后取上清,能夠在PCR反應(yīng)時(shí)使用。


3.堿變性快速制備

首先使用NaOH作用20min,再將HCI加入中和,離心后取上清,含有少量DNA。


4.玻璃棒纏繞法

使用鹽酸胍對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解,在乙醇上鋪上裂解物,然后在界面使用帶鉤或U型玻璃棒輕攪,在玻棒繞DNA沉淀液,使得80kbDNA生成。


5.異丙醇沉淀法


6.酚抽提法

首先使用蛋酶K、SDS對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破碎,化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速離心后取上清,所得DNA大小為100-150kb。


7.甲酰胺解聚法

和上面方法一樣先將細(xì)胞破碎,然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合,再透析獲得200kb左右DNA。


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