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核酸提取儀CTAB法用途以及步驟

更新時間:2025-10-15 20:35:08 類型: 閱讀量:2802
導讀:CTAB為一種陽離子去污劑,其的特性為能夠在低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖。

CTAB為一種陽離子去污劑,其的特性為能夠在低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖。在高離子強度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB與蛋白質和多聚糖形成復合物,然而不會沉淀核酸。再利用有機溶劑抽提,將蛋白、多糖、酚類等雜質去除以后,將乙醇加入沉淀,就能夠分離出核酸。


用途

主要用來生物DNA的提取。


步驟

1.在65℃水浴中將 2%CTAB抽提緩沖液預熱。


2.在研缽中放入約300mg實驗材料,使用液氮將其磨至粉狀。


3.將700ul的2%CTAB抽提緩沖液加入,輕輕攪動。


4.在1.5 ml的滅菌離心管中分倒入磨碎液磨碎液的高度約為三分之二管高。


4.jpg


5.在65℃的水浴槽或恒溫箱中放置,每隔10分鐘輕輕搖動,30~60分鐘后取出。


6.冷卻兩分鐘以后,將氯仿-異戊醇(24:1)加入,加滿管,劇烈振蕩2~3分鐘,混合均勻。


7.將其放入離心機中以10000rpm離心10分鐘,同時在另一新的滅菌離心管中加入600 ul的異丙醇。


8.10000rpm離心1分鐘以后使用移液器對清液輕輕地吸取,向著含有異丙醇的離心管內轉移,慢慢上下?lián)u動離心管30s,充分混合異丙醇與水層,使DNA絮狀物能被看見。


9.10000rpm離心1分鐘后,將液體立即倒掉,留心不要倒出白色DNA沉淀,在鋪開的紙巾上倒立離心管。


10.1min中以后,將離心管直立,將720ul的75%乙醇及80 ul 5M的醋酸鈉其中,輕輕轉動,用手指彈管尖,使得沉淀于管底的DNA塊狀物在液體中浮游。


11.放置半個小時,溶解DNA塊狀物的不純物。


12.以10000rpm離心1min后,將液體倒掉,再將800ul75%的乙醇加入,洗滌掉DNA半個小時。


13.以10000rpm離心30s后,將液體立即倒掉,在鋪開的紙巾上倒立離心管,數(shù)分鐘后,將離心管直立,使DNA干燥。


14.將50ul0.5 × TE(含RNase)緩沖液加入,溶解DNA,在37℃恒溫箱放置大約15個小時,消解RNA。


上述是比較通用的CTAB法,在實驗時,為了獲得Z佳實驗結果,可以按照不同材料加以改進。


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