流式細(xì)胞術(shù)工作原理是在細(xì)胞分子水平上通過(guò)單克隆抗體對(duì)單個(gè)細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行多參數(shù)、快速的定量分析。它可以高速分析上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，并能同時(shí)從一個(gè)細(xì)胞中測(cè)得多個(gè)參數(shù)，具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好的優(yōu)點(diǎn)，是當(dāng)代Z先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)之一。

光源、液流通路、信號(hào)檢測(cè)傳輸和數(shù)據(jù)的分析系統(tǒng)是流式細(xì)胞儀的主要組成。目前臨床中運(yùn)用流式細(xì)胞儀進(jìn)行外周血白細(xì)胞、骨sui細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞等的檢測(cè)是臨床檢測(cè)的重要組成部分。

流式細(xì)胞技術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）是利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行的一種單細(xì)胞定量分析和分選技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)是單克隆抗體及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、激光和電子計(jì)算機(jī)科學(xué)等高度發(fā)展及綜合利用的高技術(shù)產(chǎn)物。

基本結(jié)構(gòu)

流式細(xì)胞儀由三部分構(gòu)成

1.液流系統(tǒng)，包括流動(dòng)室和液流驅(qū)動(dòng)系統(tǒng)；

2.光學(xué)系統(tǒng)，包括激發(fā)光源和光束收集系統(tǒng)；

3.電子系統(tǒng)，包括光電轉(zhuǎn)換器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。流式細(xì)胞儀的工作原理是使懸浮在液體中分散的經(jīng)熒光標(biāo)記的細(xì)胞或微粒逐個(gè)通過(guò)樣品池，同時(shí)由熒光探測(cè)器捕獲熒光信號(hào)并轉(zhuǎn)換成分別代表前向散射角、側(cè)向散射角和不同熒光強(qiáng)度的電脈沖信號(hào)，經(jīng)計(jì)算機(jī)處理形成相應(yīng)的點(diǎn)圖，直方圖和加三維結(jié)構(gòu)圖像進(jìn)行分析。

用于FCM的樣本是單細(xì)胞懸液，可以是血液、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液、各種體液、新鮮實(shí)體瘤的單細(xì)胞懸液以及石蠟包埋組織的單細(xì)胞懸液等。

基本原則

1.使各種液體和懸浮細(xì)胞樣本新鮮，盡快完成樣本制備和檢測(cè)；2.針對(duì)不同的細(xì)胞樣本進(jìn)行適當(dāng)洗滌、酶消化或EDTA處理，以清除雜質(zhì)，使粘附的細(xì)胞彼此分離而形成單細(xì)胞狀態(tài)；3.對(duì)新鮮實(shí)體瘤組織可選用或聯(lián)用酶消化法，機(jī)械打散法和化學(xué)分散法來(lái)獲得足夠數(shù)量的單細(xì)胞懸液；4.對(duì)石蠟包埋組織應(yīng)先切成若干40-50um厚的蠟片，經(jīng)二甲苯脫蠟到水后，再用前述方法制備單細(xì)胞懸液；5.單細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)不應(yīng)少于10000個(gè)。

流式細(xì)胞技術(shù)的應(yīng)用：

1.其測(cè)定細(xì)胞內(nèi)DNA的變異系數(shù)Z小，一般在2%以下；

2.能準(zhǔn)確地進(jìn)行DNA倍體分析；

3.借助于熒光染料進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸的定量研究；

4.快速進(jìn)行細(xì)胞分選和細(xì)胞收集；

5.醫(yī)學(xué)應(yīng)用：免疫功能研究各種干細(xì)胞的檢測(cè)，癌癥病人的多藥耐藥性，細(xì)胞功能及代謝動(dòng)力學(xué)研究，血小板分析（心血管疾?。魇郊?xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)研究；

6 應(yīng)用于外周血內(nèi)皮細(xì)胞測(cè)定、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞等領(lǐng)域。