聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)簡(jiǎn)稱PCR（Polymerase Chain Reaction） (又稱：多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) PCR是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，由高溫變性、低溫退火（復(fù)性）及適溫延伸等反應(yīng)組成一個(gè)周期，循環(huán)進(jìn)行，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增,具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)等特點(diǎn)。下面就讓小編為大家介紹一下PCR的常見(jiàn)問(wèn)題以及yi療應(yīng)用。

PCR的常見(jiàn)問(wèn)題

為什么完全沒(méi)有PCR擴(kuò)增產(chǎn)物？

1.在加樣的時(shí)候出現(xiàn)失誤或者試劑的質(zhì)量出現(xiàn)問(wèn)題，從而造成反應(yīng)體系不完整。

2.在反應(yīng)體系里存在聚合酶yi制劑或者聚合酶失活。

3.PCR基因擴(kuò)增儀的的溫度沒(méi)有得到精確的控制。

4.模板DNA發(fā)生降解。

5.引物或反應(yīng)溫度設(shè)計(jì)不合理。

6.靶片段有過(guò)高的GC含量或者擴(kuò)增對(duì)象的長(zhǎng)度過(guò)長(zhǎng)。

為什么會(huì)有多條非特異性條帶出現(xiàn)？

1.反應(yīng)體系受到污染。

2.引物的特異性不是很好。

3.沒(méi)有選擇合適的退火溫度

為什么PCR產(chǎn)物很少？

1.聚合酶活性過(guò)低。

2.循環(huán)次數(shù)偏低。

3.模板DNA濃度過(guò)低。

為什PCR產(chǎn)物出現(xiàn)片狀拖尾？

1.DNA聚合酶過(guò)多或者酶活性過(guò)低。

2.dNTP和鎂離子的濃度過(guò)高。

3.退火溫度過(guò)低，循環(huán)次數(shù)過(guò)多。

4.模板DNA不純或者模板DNA用量過(guò)大。

5.引物的特異性不是很好，引物間形成二聚體造成非特異性擴(kuò)增。

yi療應(yīng)用

1.病原體檢測(cè)

目前，采用熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)能夠定量測(cè)定淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、結(jié)核分枝桿菌、EB病毒和巨細(xì)胞病毒等病原體。熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)靈敏度高、取樣少、快速簡(jiǎn)便。

2.產(chǎn)前診斷

直到現(xiàn)在人們依然無(wú)法zhi療遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病，只能通過(guò)產(chǎn)前監(jiān)測(cè)，減少病嬰出生，對(duì)各類遺傳性疾病的發(fā)生的預(yù)防，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)無(wú)創(chuàng)傷，易被接受。

3.腫瘤基因檢測(cè)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR不但能有效地檢測(cè)到基因的突變，而且可以準(zhǔn)確檢測(cè)癌基因的表達(dá)量。隨著與腫瘤相關(guān)的新基因的不斷發(fā)現(xiàn)，熒光定量PCR技術(shù)將會(huì)在腫瘤的研究中發(fā)揮更大的作用。