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紫外分析儀RAPD常用問題和解決方法

更新時間:2025-10-18 12:08:36 類型: 閱讀量:1195
導(dǎo)讀:紫外分析儀有三用紫外分析儀、暗箱式紫外分析儀、可照相紫外分析儀等系列,不同的紫外分析儀有不同的用途。紫外分析儀采用不同波長引進電泳分析、檢測,PCR產(chǎn)物檢測,DNA指紋圖譜分析,紙層分析或薄層分析等。

紫外分析儀分為很多系列,有三用紫外分析儀、暗箱式紫外分析儀、可照相紫外分析儀等系列,不同的紫外分析儀有不同的用途。紫外分析儀采用不同波長引進電泳分析、檢測,PCR產(chǎn)物檢測,DNA指紋圖譜分析,紙層分析或薄層分析等。


解決方法

質(zhì)量產(chǎn)物呈彌散狀

1、檢查凝膠的制備是否使用了正確的緩沖液。


2、電泳時保持比較低的電壓。


3、將DNA濃度降低。


4、將凝膠上樣量減少。


5、將循環(huán)數(shù)減少。


3.jpg


帶譜重復(fù)

僅對主要條帶進行考慮。


染色后太強的凝膠背景

1、產(chǎn)物在更高濃度的瓊脂糖凝膠、專業(yè)純凝膠或聚丙烯酰胺凝膠上進行分離


2、將染色時間減少。


3、延長凝膠脫色時間。


沒有擴增或擴增偏差

1、對母液重新配制,將引物濃度提高或者使用不同的引物。


2、在PCR程序中的第二部分將退火時間延長,或者將升溫轉(zhuǎn)換步驟之間的速率降低。


3、將每個反應(yīng)中的Taq聚合酶的濃度提高。


4、將新的組分補充加入,使用高壓將該滅菌的滅菌。


5、某一組分在部分或全部管中缺少,為了對所有的PCR組分都已加入進行確定,重復(fù)少量幾個反應(yīng)。


6、PCRYZ物能夠和DNA一起純化,使得DNA的濃度發(fā)生改變。


7、將一個清洗步驟(如苯酚抽提)加入到DNA分離中。


8、對新的DNA溶液進行稀釋。


單一帶

對引物序列不是回文結(jié)構(gòu)進行確認,使用不同的引物。


很難分辨結(jié)果

1、對Taq聚合酶活性進行檢查


2、對DNA濃度進行改變。


3、對Taq聚合酶緩沖液進行更換。


4、對引物進行檢查


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