共聚焦顯微鏡是上世紀(jì)80年代發(fā)展起來的高科技產(chǎn)品。它通過在熒光顯微鏡上加裝激光掃描及共軛裝置,用紫外或可見光激發(fā)熒光探針,并利用計算機進行圖像處理,從而得到細(xì)胞或組織內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)。共聚焦顯微鏡是細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、藥理學(xué)、生理學(xué)、遺傳學(xué)、胚胎學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)、微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)等多學(xué)科強有力的研究工具。
1、尼康
尼康的共聚焦顯微鏡系統(tǒng)的激光共聚焦部份叫Clsi,光學(xué)部份用TE2000系列顯微鏡,由于其共聚焦顯微鏡進入ZG較遲,同前的市場占有率較低。特點是:采用32個光電倍增管的光譜檢測器,可全部或部分同時工作;光柵效率增強技術(shù),使接收信號強度提高;雙積分器信號處理技術(shù),信號采集時損失少。
2、奧林巴斯
奧林巴斯的共聚焦顯微鏡是FVl000系列。特點是:應(yīng)用同步雙掃系統(tǒng)-SIMScanner,當(dāng)一束激光對樣品進行刺激的同時,另一束激光同時采集到高分辨率的成像,實現(xiàn)光刺激和觀察同步進行。應(yīng)用GX離子沉積鍍膜技術(shù)的濾光片,增加了系統(tǒng)的靈敏度,使共聚焦顯微鏡能夠觀察極弱的激光所激發(fā)出的熒光,從而把對活細(xì)胞的損傷減至Z小。
3、徠卡
徠卡共聚焦顯微鏡為TCS-SP5型。特點是:內(nèi)置5組Leicadu家ZL可程序調(diào)控分光光譜檢測系統(tǒng),每一組的光譜范圍廣達(dá)400-850nm間(波長分辨率2nm)。因為,光通過濾鏡的數(shù)目減少,其光學(xué)穿透有效率更高,影像更為鮮明,解析更高。棱鏡分光的ZL設(shè)計保證了高信噪比的優(yōu)勢,光程Z短,中間濾片不再需要,光能透過率達(dá)88%,棱鏡的光能損失只有3%,總光能損失只有10%。非常好的光傳導(dǎo)性可以檢測到更微弱的熒光,避免了其他公司為提高靈敏度而加大激光激發(fā)強度進而導(dǎo)致樣本的熒光淬滅。
4、蔡司
蔡司在共聚焦顯微鏡方面有一系列的產(chǎn)品:
LSM 510 META DuoScan型是通用型共聚焦顯微鏡,其特點是:采用X和Y軸獨立的雙鏡,進行完全線性的掃描,可定義多至99個任意大小和任意形狀區(qū)域,區(qū)域精確到一個像素;每個熒光通道均有其獨立可調(diào)的針孔,在多重標(biāo)記檢測過程中,特別是在一些三維掃描時,保證每個通道掃描光切平面和光切厚度的一致性;高度自動化的“FIND”自動預(yù)掃描功能,避免了頻繁重新設(shè)置掃描參數(shù),減少了樣品不必要的激光照射時間而無謂淬滅。
LSM 5 LIVE DuoScan型是高速共聚焦顯微鏡,被稱為世界上Z快的共聚焦顯微鏡,只需10s就能截取1000張分辨率為512×512像素的圖像。掃描速度:Z快可達(dá)120幅/s(512×512像素,12位,雙通道)及1010幅/s(512×50像素,12位,雙通道),線掃描速度60000線/s。
LSM 710系列,提出PTC激光概念,激光通過光纖接至掃描頭,配置靈活、免維護,同時確保了觀察的精確性和可重復(fù)性。
對共聚焦顯微鏡進行具體選型評估的步驟如下:
1、舉行產(chǎn)品說明會
共聚焦顯微鏡技術(shù)復(fù)雜,科技含量高,不同公司的產(chǎn)品在技術(shù)細(xì)節(jié)、操作方法、成像方式等方面是有很大差異的,本著“優(yōu)中選優(yōu)”的原則,召集多家公司的產(chǎn)品應(yīng)用專家,進行1-2次產(chǎn)品說明會是非常重要的。在說明會上,供方可通過講座介紹自己的產(chǎn)品,需方可對自己感興趣的焦點提出針對性的問題,通過互動方式來進行答疑解惑,達(dá)到“貨比三家”的目的。
2、外出參觀,現(xiàn)場操作,獲取更多一手信息
目前,我國引進的共聚焦顯微鏡約有二百多臺,各種品牌、各種型號均有在ZG落戶,它們大部分分布在國內(nèi)的科研院校中。而國內(nèi)許多科研院校的實驗室是對外開放的,對于共聚焦顯微鏡,只要支付幾百元的費用就可租用1-2h。因此,可積極走出去,制作統(tǒng)一的標(biāo)本,分別到不同品牌的共聚焦顯微鏡上進行測試,獲取更多一手信息,為今后商務(wù)談判或招標(biāo)技術(shù)參數(shù)的確定打下堅實的基礎(chǔ)。
徠卡共聚焦顯微鏡 STELLARIS DLS
3、選擇適合自己的產(chǎn)品
共聚焦顯微鏡的選型主要應(yīng)從兩個方面進行考慮:
①根據(jù)學(xué)科研究的需要來進行選型評估:
共聚焦顯微鏡各種選配件非常多,而且針對不同的研究方向,一些廠家還配有特定的軟件。由于各類選配件及軟件都是要另外付費,且價格不菲,因此在選型時應(yīng)格外嚴(yán)謹(jǐn)。比如:研究的主方向是“藥物對活細(xì)胞的作用及動力學(xué)”,則選型時除考慮共聚焦顯微鏡要有較高的“線掃描速度”外,還要考慮增配微型CO2培養(yǎng)系統(tǒng)。此外,選型時還應(yīng)根據(jù)研究的方向,考慮空間復(fù)消色差水平的要求、溫度穩(wěn)定性的要求、光譜分辨率的要求等多個方面。
②根據(jù)經(jīng)濟能力,即科研資金的多少來考慮:
共聚焦顯微鏡不同牌品、不同型號之間的價格相差懸殊。即便是同牌品、同型號的儀器,價格也會因選配件的不同而有極大的不同。
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