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電泳儀

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毛細(xì)管電泳儀

更新時(shí)間:2025-10-23 02:13:21 類型:毛細(xì)管電泳儀 閱讀量:10914
導(dǎo)讀:毛細(xì)管電泳儀(CE)是以毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,利用荷電粒子之間的淌度差異和分配系數(shù)差異進(jìn)行分離的儀器,是分析科學(xué)繼gao效液相色譜儀之后的又一重大進(jìn)展。

  毛細(xì)管電泳儀(CE)是以毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,利用荷電粒子之間的淌度差異和分配系數(shù)差異進(jìn)行分離的儀器,是分析科學(xué)繼gao效液相色譜儀之后的又一重大進(jìn)展。使分析科學(xué)從微升級(jí)進(jìn)入到納升級(jí),應(yīng)用十分廣泛。

毛細(xì)管電泳儀的工作原理

  毛細(xì)管電泳是一種在空芯的、極微小內(nèi)徑的毛細(xì)管中進(jìn)行的液-液相大、小分子的gao效蛋白分離技術(shù)。

  毛細(xì)管兩端分別浸入緩沖液中,而緩沖液中分別插入連有高壓電源的電極,根據(jù)被分離物之間電荷和體積的不同,帶電荷分子朝相反極性的電極方向移動(dòng)。又利用毛細(xì)管內(nèi)壁上的電荷和應(yīng)用的勢(shì)能而引起的電解質(zhì)移動(dòng),毛細(xì)管內(nèi)表面帶有硅羥基基團(tuán),當(dāng)毛細(xì)管內(nèi)充滿緩沖溶液時(shí),毛細(xì)管壁上的硅羥基發(fā)生解離,生成氫離子溶解在溶液中,這樣就使毛細(xì)管壁上形成雙電層,管壁是負(fù)電荷層,溶液是正電荷層。

  在毛細(xì)管的兩端加上直流電場(chǎng)后,帶正電的溶液就會(huì)整體向負(fù)極端移動(dòng),形成了電滲流。無(wú)論是帶正電、帶負(fù)電或不帶電的粒子,都在電滲流的作用下,向陰極遷移,帶正電的,受到同方向的電場(chǎng)力作用,遷移Z快,不帶電的遷移速度次之,帶負(fù)電的遷移速度Z慢,(因?yàn)樗艿脚c電滲流反方向的電場(chǎng)力作用),從而實(shí)現(xiàn)各蛋白組分的分離。

 毛細(xì)管電泳儀的工作原理.jpg

毛細(xì)管電泳儀的優(yōu)勢(shì)

  1、毛細(xì)管電泳儀的自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)完全實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)原始管上樣,操作人員只需將帶有條形碼的原始管放在儀器試管架上,初始操作完畢后即可離開(kāi),毛細(xì)管電泳儀將自動(dòng)連續(xù)運(yùn)行樣品,無(wú)須人為干預(yù)。樣本經(jīng)儀器自動(dòng)稀釋后,由高精氣壓控制的納升級(jí)樣品進(jìn)樣系統(tǒng)將樣品精確地吸入毛細(xì)管內(nèi)部。

  2、zhuan利樣品溫控系統(tǒng)該高速電泳分離系統(tǒng)整合了一個(gè)高精度Peltier自動(dòng)溫控裝置,能夠?qū)γ?xì)管中產(chǎn)生的焦耳熱進(jìn)行實(shí)時(shí)精確穩(wěn)定的控制,是保證毛細(xì)管電泳儀有效分離的關(guān)鍵,使實(shí)驗(yàn)重復(fù)性達(dá)到應(yīng)用要求。

  3、毛細(xì)管電泳儀可以進(jìn)行多種臨床項(xiàng)目的檢測(cè)。

  4、毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)結(jié)果完全數(shù)據(jù)化、信息化管理利用互聯(lián)網(wǎng)技術(shù),實(shí)現(xiàn)各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果的傳輸,包括曲線,工作流程和結(jié)果報(bào)告,并可建立實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部網(wǎng)絡(luò)資庫(kù)。

毛細(xì)管電泳儀的應(yīng)用

  1、DNA分析:

  DNA分析包括堿基、核苷、核苷酸、寡核苷酸、引物、探針、單鏈DNA、雙鏈DNA(DNA片段和PCR產(chǎn)物)和DNA序列分析。毛細(xì)管電泳儀通常用于堿基、核苷酸和簡(jiǎn)單的核苷酸等分析,以及較大的寡核苷酸、ssDNA、dsDNA和DNA序列分析。

  2、蛋白質(zhì)和肽分析:

  毛細(xì)管電泳儀在蛋白質(zhì)和肽的應(yīng)用可概括為兩方面:一是結(jié)構(gòu)表征,二是研究相互作用。

  毛細(xì)管電泳儀已廣泛用作Z有效的純度檢測(cè)手段,可檢測(cè)出多肽鏈上單個(gè)氨基酸的差異。CIEF測(cè)定等電點(diǎn),分辨度可達(dá)0.01pH單位。

  3、手性化合物分析:

  手性對(duì)映體分析和鑒定有巨大的應(yīng)用價(jià)值,已成為醫(yī)藥領(lǐng)域的一個(gè)重要課題。除gao效液相色譜法外,其余五種模式均可用于手性分析。

  使用毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行手性分析,通常在緩沖液中加入手性選擇劑,操作和分離效率均優(yōu)于gao效液相色譜儀的手性分析。今后毛細(xì)管電泳儀手性分析將會(huì)在發(fā)展更多的手性選擇劑、更深入地探討分離機(jī)理、手性藥物在體內(nèi)的作用及代謝等方面開(kāi)展研究。

  4、藥物分析和臨床檢測(cè):

  目前,毛細(xì)管電泳儀在藥物和臨床研究領(lǐng)域已成為不可缺少的有力儀器,但在醫(yī)藥領(lǐng)域尚未確定為法定方法,故未得到廣泛使用。醫(yī)藥領(lǐng)域內(nèi)大量研究工作表明,毛細(xì)管電泳儀的應(yīng)用正在走向成熟。

  毛細(xì)管電泳儀除了在臨床化學(xué)中除進(jìn)行臨床分子生物學(xué)檢測(cè)外,也廣泛用于疾病臨床診斷、臨床蛋白質(zhì)分析、臨床藥物檢測(cè)和藥物代謝研究。藥物代謝研究對(duì)毛細(xì)管電泳儀是一個(gè)挑戰(zhàn),在提高靈敏度和解決蛋白質(zhì)吸附等方面有待改進(jìn)。

  5、環(huán)境監(jiān)測(cè)和離子分析:

  毛細(xì)管電泳儀在環(huán)境監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用也日趨增多,目前主要集中在用各種模式包括CEC分離檢測(cè)土壤等環(huán)境樣品中的多環(huán)芳烴,10min內(nèi)可分離16種多環(huán)芳烴。在環(huán)境監(jiān)測(cè)中應(yīng)用還需提高靈敏度、發(fā)展?jié)饪s和富集方法。

  毛細(xì)管電泳儀比較重要的應(yīng)用還有糖的分析,目前Z成功的是用APTS作糖的衍生化試劑,標(biāo)記后用LIFD進(jìn)行單糖和多糖的測(cè)定。

  6、單細(xì)胞和單分子檢測(cè):

  單細(xì)胞和單分子檢測(cè)是毛細(xì)管電泳儀分析的Zgao境界,對(duì)生命科學(xué)和化學(xué)具有巨大的潛在意義。單細(xì)胞監(jiān)測(cè)或許會(huì)對(duì)細(xì)胞水平的藥理學(xué)和了解生命過(guò)程提供一種活體檢測(cè)手段。

毛細(xì)管電泳儀與傳統(tǒng)電泳儀的區(qū)別

  從20世紀(jì)30~40年代起,相繼發(fā)展了多種基于抗對(duì)流載體的電泳儀(如紙電泳儀和凝膠電泳儀等)。傳統(tǒng)電泳儀由于受到焦耳熱的限制,只能在低電場(chǎng)強(qiáng)度下進(jìn)行電泳操作,分離時(shí)間長(zhǎng),分離效率低。20世紀(jì)80年代初,小內(nèi)徑毛細(xì)管用于電泳儀,由此產(chǎn)生了一種新型的分析儀器——毛細(xì)管電泳儀。

  傳統(tǒng)電泳儀Zda的局限是難以克服由兩端的高電壓所引起的電介質(zhì)離子流的焦耳熱,引起粘度和速度梯度,導(dǎo)致區(qū)帶較寬,降低分離效率,極大地限制了高壓電的使用。

  毛細(xì)管電泳儀是以毛細(xì)管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,利用樣品各組分的淌度差異和分配系數(shù)差異進(jìn)行分離,是分析科學(xué)繼gao效液相色譜儀之后的又一重大進(jìn)展,使分析科學(xué)從微升級(jí)進(jìn)入到了納升級(jí)水平,不僅使單細(xì)胞乃至單分子分析成為可能,也使蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子分析有了新的轉(zhuǎn)機(jī)。

  由于毛細(xì)管電泳儀的毛細(xì)管內(nèi)徑小,比表面積大,易于散熱,可減少焦耳熱的產(chǎn)生,可使用很高的電壓。電壓升高,電場(chǎng)推動(dòng)力大,又進(jìn)一步使毛細(xì)管內(nèi)徑變小。這是毛細(xì)管電泳儀和傳統(tǒng)電泳儀的根本區(qū)別。

  自上世紀(jì)八十年代以來(lái),毛細(xì)管電泳儀發(fā)展迅速,是當(dāng)今分析化學(xué)和生物醫(yī)藥學(xué)公認(rèn)的前沿。毛細(xì)管電泳儀分離無(wú)機(jī)離子無(wú)以倫比的能力,使傳統(tǒng)電泳儀黯然失色。毛細(xì)管電泳儀分離有機(jī)分子和藥物分子,特別是分離手性分子和生物大分子的能力,對(duì)gao效液相色譜儀地位提出了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。毛細(xì)管電泳儀正成為生物樣品Z重要的分離分析手段。

 

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