紫外可見分光光度計(jì)是分析測(cè)試實(shí)驗(yàn)室里常見的一種分析儀器，屬于光學(xué)儀器的一種，可廣泛應(yīng)用于yi療衛(wèi)生、化學(xué)化工、環(huán)保、地質(zhì)、機(jī)械、冶金、石油、食品、生物、材料、計(jì)量科學(xué)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、漁業(yè)等領(lǐng)域中的科研、教學(xué)等各個(gè)方面。用來進(jìn)行定性分析、純度檢查、結(jié)構(gòu)分析、絡(luò)合物組成及穩(wěn)定常數(shù)的測(cè)定、反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究等。

紫外可見分光光度計(jì)測(cè)量波長(zhǎng)的選擇

　　當(dāng)用紫外可見分光光度計(jì)對(duì)溶液進(jìn)行測(cè)定時(shí)，首先需要選擇合適的測(cè)量波長(zhǎng)。選擇的依據(jù)是該被測(cè)溶液的吸收曲線。在一般情況下，都是選擇Z強(qiáng)吸收帶的Zda吸收波長(zhǎng)λmax作為測(cè)量波長(zhǎng)，稱為Zda吸收原則，以獲得Zgao的分析靈敏度。而且在λmax附近，吸光度隨波長(zhǎng)的變化一般較小，波長(zhǎng)的稍許偏移引起吸光度的測(cè)量偏差較小，可得到較好的測(cè)定精密度。

　　但在測(cè)量高濃度組分時(shí)，寧可選用靈敏度低一些的吸收峰波長(zhǎng)(ε較小)作為測(cè)量波長(zhǎng)，以保證校正曲線有足夠的線性范圍。如果λmax所處吸收峰太尖銳，則在滿足分析靈敏度前提下，可選用靈敏度低一些的波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)量，以減少比耳定律的偏差。繪制吸收曲線是正確選擇波長(zhǎng)的有效手段和方法。

紫外可見分光光度計(jì)吸光度范圍的選擇

　　任何紫外可見分光光度計(jì)都有一定的測(cè)量誤差，這是由于測(cè)量過程中光源的不穩(wěn)定、讀數(shù)的不準(zhǔn)確或?qū)嶒?yàn)條件的偶然變動(dòng)等因素造成的。由于吸收定律中透射比T與濃度C是負(fù)對(duì)數(shù)的關(guān)系，從負(fù)對(duì)數(shù)的關(guān)系曲線可以看出，相同的透射比讀數(shù)誤差在不同的濃度范圍中，所引起的濃度相對(duì)誤差不同，當(dāng)濃度較大或濃度較小時(shí)，相對(duì)誤差都比較大。因此，要選擇適宜的吸光度范圍進(jìn)行測(cè)量，以降低測(cè)定結(jié)果的相對(duì)誤差。

　　在實(shí)際工作中，可通過調(diào)節(jié)待測(cè)溶液的濃度或選用適當(dāng)厚度的吸收池的方法，使測(cè)得的吸光度落在所要求的范圍內(nèi)。

紫外可見分光光度計(jì)狹縫寬度的選擇

　　紫外可見分光光度計(jì)狹縫的寬度會(huì)直接影響到測(cè)定的靈敏度和校準(zhǔn)曲線的線性范圍。狹縫寬度過大時(shí)，入射光的單色光降低，校準(zhǔn)曲線偏離比耳定律，靈敏度降低;狹縫寬度過窄時(shí)，光強(qiáng)變?nèi)酰瑒?shì)必要提高儀器的增益，隨之而來的是儀器噪聲增大，于測(cè)量不利。

　　選擇紫外可見分光光度計(jì)狹縫寬度的方法是：測(cè)量吸光度隨狹縫寬度的變化。狹縫的寬度在一個(gè)范圍內(nèi)，吸光度是不變的，當(dāng)狹縫寬度大到某一程度時(shí)，吸光度開始減小。因此，在不減小吸光度時(shí)的Zda狹縫寬度，即是所欲選取的合適的狹縫寬度。對(duì)于大部分被測(cè)品種，可以使用2nm縫寬。

紫外可見分光光度計(jì)參比溶液和溶劑的選擇

　　紫外可見分光光度計(jì)的測(cè)量實(shí)際上是以通過參比池的光強(qiáng)度作為人射光強(qiáng)度來測(cè)定試樣的吸光度，先調(diào)節(jié)儀器使透過參比池溶液的吸光度為零，然后讓同一束光通過樣品，使得吸光度比較真實(shí)地反映待測(cè)物質(zhì)的濃度，所以參比溶液的選擇非常重要。

　　如果僅有待測(cè)物質(zhì)與顯色劑的反應(yīng)產(chǎn)物有吸收，可用純?nèi)軇┗蛘麴s水作參比溶液。如果顯色劑有顏色，并在測(cè)定波長(zhǎng)下有吸收，則用顯色劑溶液作參比溶液，所加人顯色劑及其它試劑的量，與試樣中的加入量應(yīng)一致。如果樣品中其它組分本身的顏色對(duì)測(cè)定有干擾，而所用顯色劑沒顏色，則用不加顯色劑的樣品溶液作參比液。

　　正確選擇合適的溶劑，對(duì)提高紫外可見分光光度計(jì)分析的準(zhǔn)確度起重要作用。為減小溶劑中雜質(zhì)的影響，應(yīng)選擇高純度的溶劑;溶劑應(yīng)不與待測(cè)物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng);待測(cè)物在溶劑中要有一定的溶解度;在測(cè)定的波長(zhǎng)范圍內(nèi)，溶劑本身沒有吸收，注意常用溶劑的Z短可用波長(zhǎng);當(dāng)用揮發(fā)性大的溶劑時(shí)，測(cè)量過程中吸收池應(yīng)加蓋。