蛋白質(zhì)的分離純化在生物化學(xué)研究應(yīng)用中使用廣泛，是一項重要的操作技術(shù)。 一個典型的真核細胞可以包含數(shù)以千計的不同蛋白質(zhì)，一些含量十分豐富，一些僅含有幾個拷貝。為了研究某一個蛋白質(zhì)，必須首先將該蛋白質(zhì)從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化出來。

主要方法

1.蛋白質(zhì)的選擇吸附分離（利用顆粒不同程度的顆粒吸附力來使分離的目的達到）。

2.按照配體特性的分離-親和層析（利用蛋白質(zhì)分子與另一種稱為配體的分子能夠特異結(jié)合這一生物性質(zhì)）

3.低溫有機溶劑沉淀法，使用如甲醇，乙醇或丙酮等與水可混溶的有機溶劑，降低多數(shù)蛋白質(zhì)的溶解度并且將其析出，和鹽析相比較，這種方法的分辨率更加的高，然而蛋白質(zhì)比較容易變形，需要在低溫下進行。

4.按照分子大小不一樣的方法，密度梯度離心（在介質(zhì)中對蛋白質(zhì)離心時，蛋白質(zhì)沉降速度取決于它的質(zhì)量和密度，質(zhì)量和密度越大，那么沉降越快；凝膠過濾（一種柱層析）；超過濾（利用蛋白質(zhì)分子不能從半透膜通過的性質(zhì)）。

5.按照溶解度差異分離，等電點沉淀法鹽溶與鹽析（使用一定濃度鹽溶液來使蛋白質(zhì)的溶解度增大或減?。?；（因為在等電點時蛋白質(zhì)分子的凈電荷為0，使分子間靜電斥力減少了，所以，聚集沉淀比較容易，這時具有Z小的溶解度）。

6.按照電荷不同的分離方法。主要分為離子交換層析和電泳分離。

注意事項

1.為了避免蛋白質(zhì)變性，不要對樣品劇烈攪動和反復(fù)凍融。

2.緩沖溶液成分盡量模擬細胞內(nèi)環(huán)。。

3.為了避免蛋白質(zhì)的氧化，將0.1~1mmol/LDTT（二硫蘇糖醇）(或β-巰基乙醇）加入到緩沖溶液中。

4.為了避免重金屬對目標蛋白的破壞，將1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑加入。

5.為了避免微生物生長，使用滅菌溶液。在純化任何一種蛋白質(zhì)的時候，均必須時刻對它的穩(wěn)定性注意維護，使它的活性得到保護，需要牢記如下一些通用的注意事項。

6.盡可能置于冰上或者在冷庫內(nèi)進行操作

7.蛋白濃度不要太稀。

8.除非是進行聚焦層。否則pH需要合適，防止所使用的緩沖溶液pH與pI相同，使蛋白質(zhì)的沉淀得以避免。

9.使用蛋白酶YZ劑，避免蛋白酶對目標蛋白的降解；在純化細胞中的蛋白質(zhì)時，將DNA酶加入來使得DNA降解，避免DNA對蛋白的污染。