固相多肽合成現(xiàn)在使用的主要有兩種策略：BOC和FMOC兩種。BOC方法合成過程中，需要反復(fù)使用TFA脫BOC，而且在Z后從樹脂上切割下來需要使用HF；FMOC方法反應(yīng)條件溫和，在一般的實驗條件下就可以進行合成。下面讓小編帶你了解一下固相合成的常見概念。

固相合成常用的樹脂

在固相合成中，樹脂的材料通常為聚苯乙烯-二乙烯苯，大小為75-150μm，交聯(lián)度為1-2%，如今使用的交聯(lián)度大多數(shù)為1%，由于在這種交聯(lián)度下，在DMF，DCM中，樹脂具有很好的溶脹性能，其在立體上為一個空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，在樹脂內(nèi)部反應(yīng)物分子能夠自由的移動。

連接手臂一端作為反應(yīng)位點，一端連接在樹脂上，其為樹脂中Z關(guān)鍵的部分。2-Cl-Trt，Rink-Amide-MBHA，PAM，MBHA，Wang等均是現(xiàn)在廣泛使用的樹脂。其中，在BOC策略中使用PAM，MBHA，由于他們對酸的穩(wěn)定性比較高，只有在在HF，TFMSA等強酸條件下，才能夠?qū)⑺鼈兦懈钕聛怼?/span>

固相合成切割方法

完成固相合成以后，若想要從樹脂上將多肽切割下來，則必須選擇合適的切割試劑，再使用冰乙 醚沉淀，離心將沉淀收集，通過HPLC分離純化，冷凍干燥從而使Z后產(chǎn)品獲取。

氨基酸序列會因為選擇的樹脂不同而不一樣，因此在切割時候，也需要選擇不完全相同的切割方法。通常選擇的切割條件為酸性環(huán)境。通常采用HF切割PAM，MBHA樹脂，在切割過程中需要將苯甲醚，對巰基苯酚，對甲苯酚等試劑加入其中。通常采用TFA切割Wang，Rink-Amide，Trt樹脂，在切割過程中將三異丙基硅烷，苯酚，乙二硫醇，苯甲硫醚，水等加入。這些添加試劑主要作為碳正離子俘獲試劑使用，以對切割反應(yīng)過程中生成的碳正離子進行俘獲為目的，從而使這些碳正離子對部分氨基酸側(cè)鏈的進攻導(dǎo)致的副反應(yīng)得以減少。Trp，Tyr為比較容易產(chǎn)生副反應(yīng)的氨基酸，反應(yīng)通常，是在室溫條件下2h-4h，TFA/TIS/EDT/H2O（94/1/2.5/2.5），HF/p-cresol/p-thiocresol（90/5/5）為常用的切割配比，10-15ml/g樹脂為通常的切割試劑用量。

游離氨基檢測

在固相多肽合成中，連接效率主要是通過對樹脂上游離氨基的檢測來進行判斷，這種檢測方法叫做Kaiser方法。若存在游離氨基，則會有蘭色，或紅褐色（pro，ser，His）顯示，此為該方法的檢測結(jié)果。2%0.001MKCN的吡啶溶液，80%苯酚的乙醇溶液，6%茚三酮的乙醇溶液均為Kaiser試劑的成分，在配制的過程中，需要先使用茚三酮對吡啶進行處理，重蒸后再使用。在檢測的過程中，獲取少量樹脂，將上述成分各取2-3滴加入，在溫度100℃下加熱1-2min，若樹脂出現(xiàn)蘭色，紅褐色或者溶液顯示蘭色，則說有還存在游離氨基，不然表示連接完全。除此以外，溴芬蘭法、苦 味 酸法、三硝基苯磺酸法也是對游離氨基檢測的方法。