紫外可見分光光度計(jì)是一類很重要的分析儀器,無(wú)論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測(cè)、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門,紫外可見分光光度計(jì)都有廣泛的應(yīng)用。
分光光度計(jì)是杜包斯克和奈斯勒等人在1854年將朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律應(yīng)用于定量分析化學(xué)領(lǐng)域,并且設(shè)計(jì)了diyi臺(tái)比色計(jì)。
到1918年,美國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)局制成了diyi臺(tái)紫外可見分光光度計(jì)。此后,紫外可見分光光度計(jì)經(jīng)不斷改進(jìn),又出現(xiàn)自動(dòng)記錄、自動(dòng)打印、數(shù)字顯示、微機(jī)控制等各種類型的儀器,使光度法的靈敏度和準(zhǔn)確度也不斷提高,其應(yīng)用范圍也不斷擴(kuò)大。紫外可見分光光度計(jì)從問(wèn)世以來(lái),在應(yīng)用方面有了很大的發(fā)展,尤其是在相關(guān)學(xué)科發(fā)展的基礎(chǔ)上,促使分光光度計(jì)儀器的不斷創(chuàng)新,功能更加齊全,使得光度法的應(yīng)用更拓寬了范圍。目前,分光光度法已為工農(nóng)業(yè)各個(gè)部門和科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域所廣泛采用,成為人們從事生產(chǎn)和科研的有力測(cè)試手段。目前市場(chǎng)上有兩類主流產(chǎn)品:掃描光柵式分光光度計(jì)和固定光柵式分光光度計(jì)。
紫外可見分光光度計(jì)有著較長(zhǎng)的歷史,其主要理論框架早已建立,制作技術(shù)相對(duì)成熟。但構(gòu)成紫外可見分光光度計(jì)的光、機(jī)、電、算等任何一方面的新技術(shù)都可能再推動(dòng)紫外可見分光光度計(jì)整體性能的進(jìn)步。在追求準(zhǔn)確、快速、可靠的同時(shí),小型化、智能化、在線化、網(wǎng)絡(luò)化成為了現(xiàn)代紫外可見分光光度計(jì)新的增長(zhǎng)點(diǎn)。
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量,相應(yīng)地發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光能量的情況也就不會(huì)相同,因此,每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長(zhǎng)處的吸光度的高低判別或測(cè)定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)。分光光度分析就是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜研究物質(zhì)的成分、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)間相互作用的有效手段。
紫外可見分光光度計(jì)的定量分析基礎(chǔ)是朗伯-比爾定律。即物質(zhì)在一定濃度的吸光度與它的吸收介質(zhì)的厚度呈正比,其數(shù)學(xué)表示式如下:A=abc。A—吸光度;a—摩爾吸光系數(shù);b—吸收介質(zhì)的厚度;c—吸光物質(zhì)的濃度。
1、光學(xué)系統(tǒng)原理
由光源鎢燈和氘燈發(fā)出的復(fù)合光經(jīng)由步進(jìn)電機(jī)控制帶動(dòng)反光鏡M1,反射通過(guò)入射狹縫,并進(jìn)入單色器中,光柵衍射出的單色光經(jīng)準(zhǔn)直鏡M2調(diào)焦,會(huì)聚通過(guò)出射狹縫,光束到達(dá)斬光器時(shí),一段時(shí)間內(nèi)的光射成為參比光路,另一段時(shí)間內(nèi)的光透射成為樣品光路。Z后兩光交替地照射在檢測(cè)器(光電倍增管)。
2、電器系統(tǒng)原理
光電倍增管檢測(cè)出的信號(hào)經(jīng)由前置放大器,驅(qū)動(dòng)卡傳遞給微機(jī)控制器,由微機(jī)控制器推動(dòng)驅(qū)動(dòng)卡居中協(xié)調(diào)各部分。
紫外可見分光光度計(jì)主要由輻射源、單色器、試樣容器、檢測(cè)器和顯示裝置等部分組成。
輻射源:必須具有穩(wěn)定的、有足夠輸出功率的、能提供儀器使用波段的連續(xù)光譜,如鎢燈、鹵鎢燈(波長(zhǎng)范圍350~2500納米),氘燈或氫燈(180~460納米),或可調(diào)諧染料激光光源等。
單色器:它由入射、出射狹縫、透鏡系統(tǒng)和色散元件(棱鏡或光柵)組成,是用以產(chǎn)生高純度單色光束的裝置。其功能包括將光源產(chǎn)生的復(fù)合光分解為單色光和分出所需的單色光束。
試樣容器:又稱吸收池。供盛放試液進(jìn)行吸光度測(cè)量之用,分為石英池和玻璃池兩種,前者適用于紫外到可見區(qū),后者只適用于可見區(qū)。容器的光程一般為0.5~10厘米。
檢測(cè)器:又稱光電轉(zhuǎn)換器。常用的有光電管或光電倍增管,后者較前者更靈敏,特別適用于檢測(cè)較弱的輻射。近年來(lái)還使用光導(dǎo)攝像管或光電二極管矩陣作檢測(cè)器,具有快速掃描的特點(diǎn)。
顯示裝置:這部分裝置發(fā)展較快。較高級(jí)的光度計(jì),常備有微處理機(jī)、熒光屏顯示和記錄儀等,可將圖譜、數(shù)據(jù)和操作條件都顯示出來(lái)。

紫外可見分光光度計(jì)具有靈敏度高、選擇性好、準(zhǔn)確度高、使用濃度范圍廣、分析成本低、操作簡(jiǎn)便、快速、應(yīng)用廣泛等特點(diǎn)。
紫外可見分光光度計(jì)主要分為單波長(zhǎng)單光束直讀式分光光度計(jì)、單波長(zhǎng)雙光束自動(dòng)記錄式分光光度計(jì)和雙波長(zhǎng)雙光束分光光度計(jì)三種類型。
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