厭氧培養(yǎng)箱是一種可在無(wú)氧環(huán)境下進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)及操作的專用裝置。可培養(yǎng)Z難生長(zhǎng)的厭氧生物,又能避免以往厭氧生物在大氣中操作時(shí)接觸氧氣而死亡的危險(xiǎn)性。
1、將混合氣瓶、氮?dú)馄堪卜牌椒€(wěn),并分別裝好減壓閥(含壓力表),安置在適當(dāng)位置;
2、關(guān)緊取樣室內(nèi)外門,并抽真空校驗(yàn);
3、操作室第二次置換(氮?dú)庵脫Q)重復(fù)一次充氮過(guò)程,取樣室先抽真空,并注意隨時(shí)用腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣。
4、接上氣路并檢查氣路,為防止漏氣,必要時(shí)可在厭氧培養(yǎng)箱各接管處用密封膠粘合;

一、操作室厭氧環(huán)境形成
1、按使用要求放置好必要的配件和器具,并向操作室內(nèi)放入二個(gè)無(wú)毒塑料袋。
2、通電源開(kāi)照明燈,開(kāi)控溫儀,調(diào)節(jié)所需溫度及安全溫度。
3、操作室內(nèi)放入1000g鈀粒(封閉)和500g干燥劑,并放入美蘭指示劑(封閉)。
4、關(guān)緊取樣室內(nèi)外門,并抽真空校驗(yàn)。
5、操作室內(nèi)diyi次置換(氮?dú)庵脫Q):
(1)先用橡皮管插入操作室內(nèi)進(jìn)氣口,另一頭插入塑料袋。
(2)接通氮?dú)膺M(jìn)氣路,打開(kāi)氮?dú)饪刂崎y,使二只塑料袋充足氮?dú)?,然后扎緊袋口。
(3)把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊。
(4)把塑料袋內(nèi)氮?dú)鉂u漸地放于操作室內(nèi),至全部放出。
6、操作室第二次置換(氮?dú)庵脫Q)重復(fù)一次充氮過(guò)程,并注意隨時(shí)用腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣。
7、操作室第三次置換(混合氣體置換):
(混合氣體配比為:N2:H2:CO2=85%:10%:5%)
(1)調(diào)換氣路打開(kāi)混合氣道通閥門進(jìn)氣,充氣時(shí)要隨時(shí)腳踏開(kāi)關(guān)開(kāi)閉排氣。
(2)混合氣充滿塑料袋后,關(guān)掉混合氣直通閥(三通閥),使混合氣經(jīng)過(guò)流量計(jì)輸入操作并調(diào)整流量計(jì),流量為每分鐘10毫升左右。
(3)把塑料袋內(nèi)混合氣漸漸排于操作室內(nèi)。
(4)通過(guò)三次換氣后,操作室內(nèi)氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。
8、操作室內(nèi)打開(kāi)鈀粒除氧劑,接通除氧催化器電源進(jìn)行催化除氧,一小時(shí)后打開(kāi)美蘭指示劑觀察其變色情況,不變色為操作室內(nèi)達(dá)到厭氧環(huán)境。
9、開(kāi)紫外線滅菌燈,室內(nèi)進(jìn)行滅菌處理。滅菌時(shí)間自定。
二、菌種的置入和培養(yǎng)
1、檢查取樣室內(nèi)門并關(guān)緊。
2、打開(kāi)取樣室外門,將菌種放入取樣室后即關(guān)上外門。
3、取樣室充氮置換三次過(guò)程:先抽真空度500毫米汞柱(66Kpa)以上停,然后人工打開(kāi)氮?dú)忾y門進(jìn)氣,使指針回復(fù)零位后進(jìn)行下次操作。
4、如選定真空度較低就需要增加置換的次數(shù)。
5、取樣室內(nèi)外門開(kāi)啟,關(guān)緊要抽低真空度100毫米汞柱(13Kpa)檢驗(yàn)及幫助操作。
6、厭氧培養(yǎng)箱需要長(zhǎng)期連續(xù)使用的條件:
(1)每天在操作室內(nèi)打開(kāi)美蘭指示劑觀察,正常情況下使用。如不正常就必須重新?lián)Q氣。
(2)要長(zhǎng)期連續(xù)輸入微量的混合氣體,使補(bǔ)進(jìn)的氫氣能和微量的氧結(jié)合通過(guò)催化吸收,保證了室內(nèi)厭氧狀態(tài),補(bǔ)入混合氣流量選定為每分鐘10毫升左右。
(3)連續(xù)培養(yǎng)運(yùn)行一天,更換一次除氧劑和干燥劑。
7、接種棒滅菌器的應(yīng)用:
(1)隨時(shí)用鎳鉻電熱絲使電極短路而變赤熱以進(jìn)行殺菌
(2)熔蠟處可直接放上,試管封蠟口旋轉(zhuǎn)熔蠟。
8、操作室里的厭氧培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度可任意選擇和控制。
9、混合氣瓶、氮?dú)馄枯敵鰤毫φ{(diào)整:調(diào)節(jié)減壓閥,使輸出壓力為0.1Mpa左右。

1、厭氧培養(yǎng)箱盡可能地安裝于空氣清靜,溫度變化較小的地方。
2、開(kāi)機(jī)前應(yīng)全面熟悉和了解各組成配套儀器、厭氧培養(yǎng)箱的說(shuō)明書(shū)、掌握正確的使用方法。
3、培養(yǎng)物放入必須是在操作室內(nèi)達(dá)到厭氧環(huán)境后放入。
4、如發(fā)生故障(停氣等原因)操作室內(nèi)仍可保持12小時(shí)厭氧狀態(tài)。(超過(guò)12小時(shí)則根據(jù)需要把培養(yǎng)物取出另作處理)。
5、經(jīng)常注意厭氧培養(yǎng)箱氣路有無(wú)漏氣現(xiàn)象。
6、調(diào)換氣瓶時(shí),注意要扎緊氣管,避免流入含氧氣體。
7、真空泵按要求使用,定期檢查加油。
8、停止使用,關(guān)閉總電源鍵,及厭氧培養(yǎng)箱后部的電源開(kāi)關(guān)。
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