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小鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子使用說明書
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本文由 上海研域商貿(mào)有限公司 整理匯編
2015-04-15 00:00 366閱讀次數(shù)
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小鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子使用說明書
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小鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子使用說明書
- 小鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子使用說明書[詳細]
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2015-04-15 00:00
報價單
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大鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)說明書
- www.biokanu.com大鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)的含量。實驗原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)水平。用純化的膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF),再與HRP標記的GDNF抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品:90ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為60ng/L,40ng/L,20ng/L,10ng/L,5ng/L)。加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。注意事項:試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%檢測范圍:2ng/L-80ng/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-09-22 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA kit說明書
- 人膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA kit說明書[詳細]
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2014-08-22 00:00
專利
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人膠質(zhì)細胞系來源神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒
- 人膠質(zhì)細胞系來源神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒[詳細]
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2024-09-28 14:37
選購指南
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大鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒
- 大鼠膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒[詳細]
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2013-12-11 00:00
其它
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人膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)檢測試劑盒
- 人膠質(zhì)細胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)檢測試劑盒[詳細]
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2015-03-09 00:00
報價單
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小鼠膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒說明書
- 小鼠膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗小鼠GDNF單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的GDNF與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗小鼠GDNF,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍色,Z后加終止液,在450nm處測OD值,GDNF濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中GDNF濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標板(CoatedWells)96孔酶標抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標準品(Standards):4ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本:血清、血漿(EDTA)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復凍融。標本可能需要稀釋,請預(yù)先做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù)。2.標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成4000pg/ml的溶液。設(shè)標準管8管,每管加入標本稀釋液300ul。在**管中加入4000pg/ml的標準品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標準品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)GDNF含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的GDNF檢測濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的小鼠GDNF。不與小鼠其它細胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9%。注意事項1.以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應(yīng)同時做標準曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細]
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2018-09-13 10:00
產(chǎn)品樣冊
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小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)elisa試劑盒使用說明書
- Elisakit規(guī)格:48孔配置/96孔配置標準品稀釋液:1.5ml×1瓶酶標試劑:3ml×1瓶(48)/6ml×1瓶(96)【小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)elisa試劑盒】本試劑僅供研究使用計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。試劑盒組成:封板膜:2片(48)/2片(96)說明書:1份密封袋:1個標準品:2700ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存酶標包被板:1×481×962-8℃保存樣品稀釋液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液:3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存實驗原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)水平。用純化的小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4),再與HRP標記的神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)濃度。目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)的含量。服務(wù)承諾:供貨期:款到發(fā)貨。工作時間內(nèi)免費的技術(shù)咨詢和指導。請來電咨詢?yōu)榭蛻籼峁﹣順訖z測服務(wù),Zda限度實驗結(jié)果的有效性(免費代測)。保存條件及有效期:試劑盒保存:2-8℃|有效期:6個月【小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)elisa試劑盒】樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為1800ng/L,1200ng/L,600ng/L,300ng/L,150ng/L)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行?!拘∈笊窠?jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)elisa試劑盒】注意事項:1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%檢測范圍:0.2IU/L-6IU/L[詳細]
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2018-09-27 10:00
產(chǎn)品樣冊
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小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)elisa試劑盒說明書
- 小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)elisa試劑盒說明書l本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)的含量。l有效期:6個月l保存條件:2-8℃l本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷實驗原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。樣本處理及要求1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復凍融。2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心20分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復凍融。3.組織勻漿:用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶YZ劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。Z后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。4.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復凍融。注:標本溶血會影響Z后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。標本處理1.本公司只對試劑盒本身負責,不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責,請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。2.實驗前應(yīng)預(yù)測標本含量,如果標本濃度過高,應(yīng)對標本進行稀釋,使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。3.若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進行預(yù)實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。4.使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致ELISA實驗結(jié)果偏差。5.若樣本為細胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。6.某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。7.建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結(jié)果偏差。需要而未提供的試劑和器材酶標儀(450nm)高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱蒸餾水或去離子水注意事項嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。在儲存和溫育時避免強光直接照射。平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。不能使用過期產(chǎn)品。如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。試劑準備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。實驗結(jié)果計算以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。試劑盒性能1.檢測范圍:0.25ng/mL8ng/mL。2.靈敏度:Zdi檢測濃度小于0.1ng/mL。3.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4.重復性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。說明1.由于現(xiàn)有條件及科學技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風險。2.Z終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必準備充足的標本備份。3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到**的檢測結(jié)果。[詳細]
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2018-11-16 10:02
產(chǎn)品樣冊
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人膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒說明書
- 人膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)ELISA試劑盒原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人GDNF單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的GDNF與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人GDNF,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍色,Z后加終止液,在450nm處測OD值,GDNF濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中GDNF濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標板(CoatedWells)96孔酶標抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標準品(Standards):4ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本:血清、血漿(EDTA)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復凍融。標本可能需要稀釋,請預(yù)先做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù)。2.標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成4000pg/ml的溶液。設(shè)標準管8管,每管加入標本稀釋液300ul。在**管中加入4000pg/ml的標準品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標準品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)GDNF含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的GDNF檢測濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的人GDNF。不與人其它細胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9%。注意事項1.以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應(yīng)同時做標準曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細]
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2018-09-13 10:01
產(chǎn)品樣冊
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FH-M081-小鼠神經(jīng)膠質(zhì)細胞說明書
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2024-05-30 09:33
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2015-03-03 00:00
操作手冊
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2015-04-29 00:00
專利
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2018-09-13 10:01
產(chǎn)品樣冊
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小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA試劑盒
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2013-12-09 00:00
產(chǎn)品樣冊
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小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)ELISA試劑盒
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2013-12-09 00:00
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小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT-3)檢測試劑盒
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2015-08-28 00:00
期刊論文
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小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3酶聯(lián)免疫分析(ELISA
- 小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)的含量。實驗原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)水平。用純化的小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3),再與HRP標記的神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品:45ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3酶聯(lián)免疫分析(ELISA)樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為30ng/L,20ng/L,10ng/L,5ng/L,2.5ng/L)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3酶聯(lián)免疫分析(ELISA)注意事項:1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6物避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15%小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3酶聯(lián)免疫分析(ELISA)檢測范圍:1ng/L-40ng/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2024-09-29 17:36
產(chǎn)品樣冊
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2024-09-20 03:47
專利
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2016-04-07 00:00
標準
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