本文由 北京歐蘭科技發(fā)展有限公司 整理匯編

2012-07-17 00:00 270閱讀次數(shù)

收藏 評價 舉報

• 分享

立即下載

參與評論

評論

登錄后參與評論

登錄或新用戶注冊

• 微信登錄
• 密碼登錄
• 短信登錄

請用手機微信掃描下方二維碼
快速登錄或注冊新賬號

微信掃碼，手機電腦聯(lián)動

注冊登錄即表示同意《儀器網(wǎng)服務條款》和《隱私協(xié)議》

賬  號：

密  碼：

圖片碼： 看不清？
換一張？

手機和郵箱號注冊新賬號>> 忘記密碼？

手機號：

圖片碼： 看不清？
換一張？

短信碼： 獲取短信碼

手機和郵箱號注冊新賬號>> 忘記密碼？

更多資料

• 實驗流體力學中的圖像層析重構(gòu)：簡述及問題

  實驗流體力學中的圖像層析重構(gòu)：簡述及問題[詳細]

  2012-07-17 00:00

  應用文章

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 應用用于層析PIV（Tomo-PIV）的運動跟蹤增強MART重構(gòu)算法（

  應用用于層析PIV（Tomo-PIV）的運動跟蹤增強MART重構(gòu)算法（[詳細]

  2012-07-13 00:00

  標準

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• FlowMaster 層析PIV實驗測量結(jié)果

  FlowMaster 層析PIV實驗測量結(jié)果[詳細]

  2024-09-28 00:16

  標準

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 厚片光PIV系統(tǒng)利用層析PIV重構(gòu)原理計算全部的三維應力張

  厚片光PIV系統(tǒng)利用層析PIV重構(gòu)原理計算全部的三維應力張[詳細]

  2008-02-05 00:00

  課件

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 梯度實驗常見的問題與解決方案

  梯度實驗常見的問題與解決方案[詳細]

  2012-07-20 00:00

  選購指南

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 菌種培養(yǎng)容器的發(fā)展概述及瓶頸問題透氣性能的應對之道

  菌種培養(yǎng)容器的發(fā)展概述及瓶頸問題透氣性能的應對之道[詳細]

  2015-05-26 00:00

  報價單

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA實驗質(zhì)量控制問題

  ELISA實驗質(zhì)量控制問題[詳細]

  2024-09-18 18:09

  其它

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 三坐標測量機的論述及發(fā)展前景

  三坐標測量機的問世，不僅解決了復雜零件研制急需先進檢測儀 器和檢測技術的難題，而且還迎合了產(chǎn)品更新節(jié)奏的加快，對產(chǎn)品檢測速度的要求，因此三坐標在測量領域得到廣泛的應用，體現(xiàn)出它的重要性和廣闊的發(fā)展前景。[詳細]

  2018-11-28 09:45

  期刊論文

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 計算流體力學(CFD)方法分析先進流動反應器的流體力學和

  計算流體力學(CFD)方法分析先進流動反應器的流體力學和[詳細]

  2011-03-07 00:00

  標準

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• YC-1M /YC-2M智能型全不銹鋼層析實驗冷柜

  YC-1M /YC-2M智能型全不銹鋼層析實驗冷柜[詳細]

  2015-08-28 00:00

  安裝說明

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 噴霧干燥技術中實驗過程濕粉粘壁問題的解決方法

  噴霧干燥實驗過程中，有些樣品干燥時主要表現(xiàn)是干燥室內(nèi)到處都有粘著的濕粉。其原因是：[詳細]

  2024-01-31 10:17

  其它

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• ELISA實驗原理、步驟、問題分析

  上海恒遠生物科技有限公司專業(yè)供應各種屬elisa試劑盒，提供免費代測服務，保證實驗結(jié)果客觀真實性。我公司對試劑盒質(zhì)量1**%保證，若存在質(zhì)量問題，我們無條件包退換。若需要了解試劑盒的詳細信息，請來的咨詢：電話：021-6052049813636351217業(yè)務QQ:1005074258何經(jīng)理ELISA實驗原理、步驟、ELISA問題分析ELISA實驗原理酶聯(lián)免疫吸附測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）原理1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發(fā)展成液體標本中微量物質(zhì)的測定方法。ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度類型及步驟ELISA的主要常用類型及步驟1.間接法測抗體間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體（二抗）以檢測與固相抗原結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：1）將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗原，洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。2）加稀釋的樣本，保溫反應。樣本中的特異抗體與固相抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體，樣本中的其他成份在洗滌過程中被洗去。3）加酶標抗抗體。固相免疫復合物中的抗體與酶標抗抗體結(jié)合，從而間接記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關。4）加底物顯色。2.雙抗體夾心法測抗原雙抗體夾心法是檢測抗原Z常用的方法，操作步驟如下：1）將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。2）加受檢樣本，保溫反應。樣本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。3）加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與樣本中受檢抗原的量相關。4）加底物顯色。3.雙抗原夾心法測抗體反應原理和模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體4.競爭法測抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，可以采用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合。標本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標抗原愈少，Z后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。ELISAQ&A如何選擇合適的陽性對照?陽性對照的基本組成應該盡量與檢測樣本的組成一致，一般陽性對照多以含蛋白保護劑的緩沖液為基質(zhì)，加入一定量的待檢物質(zhì)。比如，以人血清為標本的測定，陽性對照多用確定的病人血清或者以復鈣人血漿為原料加入一定量標準品。如何選擇合適的陰性對照?陰性對照的基本組成也應該盡量與檢測樣本的組成一致，**先行檢測確定其中不含待檢物質(zhì)。比如，檢測人血清標本時，陰性對照應該選擇正常人血清;檢測免疫動物血清中抗體效價時，陰性對照應該選擇該動物的免疫前血清。如何選擇Zyou化的包被條件?1.包被抗原的選擇包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經(jīng)純化才能用直接吸附法包被，對于含雜質(zhì)較多的抗原可以采用間接捕獲法包被（先用能夠與目的抗原反應的物質(zhì)如抗體直接吸附在酶標板上，再通過特異性反應使抗原固相化）。經(jīng)純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物，由于分子量太小，往往難于直接吸附在酶標板上，一般都先使其與無關蛋白質(zhì)如BSA等偶聯(lián)，偶聯(lián)物吸附于固相載體上。2.包被液的選擇一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液，如果包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。3.包被溫度的選擇通常是4-8度條件下過夜或者37度保溫2小時，我們強烈建議4-8度條件下包被，有利于蛋白活性的保持。4.包被濃度的選擇包被的Z適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)變化，一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml，要明確針對特定包被抗原的Z適包被濃度需要通過實驗來確定。包板后需要封閉嗎?應該選擇什么樣的封閉體系?封閉是否必要，取決于ELISA的模式及具體的實驗條件。一般說來，雙抗體夾心法，只要酶標記物是高活性的，操作時洗滌徹底，不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果。而在間接法測定中，封閉一般是必不可少的。常用的封閉劑有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明膠、5%的脫脂奶粉，AbMART推薦使用5%脫脂奶粉，價廉而且封閉能力強，不過5%脫脂奶粉只適合短期內(nèi)使用，不宜長期保存，所以試劑盒中較少使用。如何正確使用酶結(jié)合物?1.酶結(jié)合物的稀釋液在稀釋液中常加入高濃度的無關蛋白質(zhì)（例如1%BSA或5%脫脂奶粉），通過競爭YZ酶結(jié)合物在固相載體上的非特異性吸附。一般還加入能夠YZ蛋白質(zhì)吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑，如吐溫20（0.05%的濃度較為適宜）。2.正確稀釋酶結(jié)合物酶結(jié)合物的合適工作濃度需要通過預實驗來確定，濃度過高易導致本底偏高，濃度過低則會導致陽性信號的減弱。酶結(jié)合物**在使用前稀釋，稀釋后的酶結(jié)合物不宜長期保存，因為低濃度的酶結(jié)合物極易失活。問題可能的原因解決方法陰性對照產(chǎn)生了陽性的結(jié)果試劑或者耗材污染更換試劑，使用一次性耗材洗板出現(xiàn)問題更換更強配方的洗滌液，增加洗板次數(shù)，延長洗板時間如果是在雙抗體夾心法中出現(xiàn)，有可能是包被抗體與二抗間有交叉反應更換包被抗體或二抗使用了過多的抗體減少抗體使用量整板出現(xiàn)高背景二抗產(chǎn)生了非特異性吸附減少二抗使用量，縮短二抗反應時間顯色液不新鮮使用現(xiàn)配的顯色液顯色反應時間過長沒有終止控制顯色反應時間，及時終止反應試劑或者耗材污染更換試劑，使用一次性耗材反應溫度過高導致的非特異性吸附嚴格控制反應在Z適溫度下進行封閉條件不佳導致的非特異性吸附更換封閉能力更強的封閉液，延長封閉時間反應信號偏低包被條件不合適提高包板濃度，延長包板時間抗原抗體反應不夠充分延長反應時間，確保反應在Z適溫度下進行顯色液配方不恰當增加顯色底物的量二抗結(jié)合不夠提高二抗?jié)舛?，延長反應時間，更換效果更好的二抗梯度稀釋做ELISA時產(chǎn)生跳孔現(xiàn)象酶標板疊放導致傳熱不均勻，各孔反應溫度有差異盡量避免酶標板疊放在一起移液器稀釋時未能保持連續(xù)性定期校準移液器，確保移液器的正確使用反應溶液蒸發(fā)酶標板用封條密封或者加蓋洗板不均勻確定洗板機能夠正常工作酶標板底有雜物或者水珠讀板時清理干凈酶標板底部[詳細]

  2018-11-16 10:02

  產(chǎn)品樣冊

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• GB-T_18743-2002_簡支梁沖擊實驗方法.pdf

  GB-T_18743-2002_簡支梁沖擊實驗方法.pdf[詳細]

  2015-04-23 00:00

  選購指南

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 電子天平使用中的問題

  電子天平使用中的問題[詳細]

  2013-05-09 00:00

  專利

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 真空泵運行中的問題

  介紹了液環(huán)式真空泵的工作原理，針對氯堿行業(yè)蒸餾工藝中液環(huán)式真空泵運行過程中經(jīng)常出現(xiàn)真 空度不足的問題，提出了解決辦法，并給出了預防措施。[詳細]

  2018-08-23 16:52

  標準

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 板式塔流體力學特性的測定

  板式塔流體力學特性的測定[詳細]

  2016-05-12 00:00

  產(chǎn)品樣冊

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 葉片電極誘導電流體力學羽流的數(shù)值模擬和PIV實驗研究

  葉片電極誘導電流體力學羽流的數(shù)值模擬和PIV實驗研究[詳細]

  2011-06-19 00:00

  標準

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 簡析對熱失重實驗數(shù)據(jù)產(chǎn)生影響的八大因素

  簡析對熱失重實驗數(shù)據(jù)產(chǎn)生影響的八大因素[詳細]

  2014-10-20 00:00

  其它

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 流體力學場圖像系統(tǒng)資料

  流體力學場圖像系統(tǒng)資料[詳細]

  2024-09-17 05:14

  應用文章

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 離心機應用中的腐蝕問題

  離心機應用中的腐蝕問題[詳細]

  2008-12-22 00:00

  標準

  |

  • 
  • 
  • 
  •