本文由 上海富衡生物科技有限公司 整理匯編

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  電話：021-6533363955229872網(wǎng)址：http://www.westang.com小鼠環(huán)氧化酶-2（COX-2）ELISA試劑盒（用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi)）原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗小鼠COX-2單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的COX-2與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗小鼠COX-2，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，Z后加終止液，在450nm處測(cè)OD值，COX-2濃度與OD值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中COX-2濃度。試劑盒組成（2-8℃保存）酶標(biāo)板（CoatedWells）96孔酶標(biāo)抗體工作液（EnzymeConjugate）12ml10×標(biāo)本稀釋液（SampleBuffer）12ml20×濃縮洗滌液（WashBuffer）50ml標(biāo)準(zhǔn)品（Standards）：100ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗體工作液（BiotinylatedAntibody）12ml終止液（StopSolution）12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融。正常標(biāo)本測(cè)定前用標(biāo)本稀釋液至少作1：20稀釋（取10ul，加標(biāo)本稀釋液190ul,稀釋20倍）。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml蒸餾水混勻，配成200ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管，**管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入200ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。4.洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）檢測(cè)程序1.加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板：同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0ng/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)COX-2含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度：Z小的COX-2檢測(cè)濃度小于0.15ng/ml。2.特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的小鼠COX-2。不與小鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板見(jiàn)變異系數(shù)均小于10％。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過(guò)程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開(kāi)封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！[詳細(xì)]

  2018-09-13 10:01

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