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5-尿苷二磷酸
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2024-09-20 13:30 377閱讀次數(shù)
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5-尿苷二磷酸
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小鼠尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)ELISA試劑盒
- 小鼠尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)ELISA試劑盒操作說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T9.5ng/L-300ng/L使用目的:本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)水平。用純化的小鼠尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT),再與HRP標(biāo)記的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準曲線計算樣品中小鼠尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)濃度。小鼠尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)ELISA試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準品(600ng/L)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。小鼠尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)ELISA試劑盒操作步驟1.標(biāo)準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。300ng/L5號標(biāo)準品150l的原倍標(biāo)準品加入150l標(biāo)準品稀釋液150ng/L4號標(biāo)準品150l的5號標(biāo)準品加入150l標(biāo)準品稀釋液75ng/L3號標(biāo)準品150l的4號標(biāo)準品加入150l標(biāo)準品稀釋液37.5ng/L2號標(biāo)準品150l的3號標(biāo)準品加入150l標(biāo)準品稀釋液18.75ng/L1號標(biāo)準品150l的2號標(biāo)準品加入150l標(biāo)準品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50l,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l,然后再加待測樣品10l(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50l,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。計算以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準物的濃度與OD值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。小鼠尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)ELISA試劑盒注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標(biāo)準曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照小鼠尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT)ELISA試劑盒說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。2.有效期:6個月上海心語生物科技有限公司銷售部聯(lián)系方式:021-31128858,QQ:2734996763[詳細]
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2019-01-02 10:00
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2018-11-24 10:00
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