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物理吸附基礎(chǔ)知識 十三
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本文由 麥克默瑞提克(上海)儀器有限公司 整理匯編
2016-05-12 00:00 680閱讀次數(shù)
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物理吸附基礎(chǔ)知識 十三
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2019-01-02 10:00
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2018-08-30 10:00
產(chǎn)品樣冊
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免疫組化基礎(chǔ)知識
- 免疫組織化學(xué)的概念:免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學(xué)。免疫組化實驗所用的抗體有哪些?免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體,應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。免疫組化實驗所用的組織和細(xì)胞標(biāo)本有哪些?實驗所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類,前者包括石蠟切片(病理大片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本Z常用、Z基本的方法,對于組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對照觀察;還能長期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進(jìn)行抗原修復(fù),是免疫組化中的組織標(biāo)本制作方法。石蠟切片為什么要做抗原修復(fù)?有哪些方法?石蠟切片標(biāo)本均用甲醛固定,使得細(xì)胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇,同時蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進(jìn)行IHC染色時,需要先進(jìn)行抗原修復(fù)或暴露,即將固定時分子之間所形成的交聯(lián)破壞,而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。常用的抗原修法有微波修復(fù)法,高壓加熱法,酶消化法,水煮加熱法等,常用的修復(fù)液是pH6.0的0.01mol/L的檸檬酸鹽緩沖液。免疫組化常用的染色方法有哪些?根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法,免疫酶標(biāo)法,親和組織化學(xué)法,后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位,其中生物素抗生物素染色法Z常用??贵w交叉反應(yīng)的原因:指抗體除與其相應(yīng)的抗原發(fā)生特異性反應(yīng)外還與其它抗原發(fā)生反應(yīng)。產(chǎn)生的原因有以下幾個方面:1.抗原特異性指用于免疫動物的抗原性物質(zhì)中含有多種抗原分子,它引起動物產(chǎn)生針對多種抗原分子特異性的相應(yīng)抗體。任何其它物質(zhì)只要含有一種或多種與上述物質(zhì)相同的抗原分子,必將與上述多特異性的抗血清發(fā)生交叉反應(yīng)。2.共同決定簇即兩種抗原分子中都含有相同的抗原決定簇。3.決定簇相似,兩種不同的抗原決定簇,如果結(jié)構(gòu)大致相同,由于空間構(gòu)象關(guān)系,某一決定簇的相應(yīng)抗體可以與大致相同的決定簇發(fā)生交叉反應(yīng)。當(dāng)然抗原一抗體之間構(gòu)象相似時的結(jié)合力小于吻合時的結(jié)合力。多抗和單抗特性比較:1.均一性。一種單抗中,每個抗體的化學(xué)結(jié)構(gòu)和氨基酸順序都相同,只有一種Ig亞類。即單抗是一種純度很高的均一抗體。而從不同動物,不同時期所得到的多抗,各有不同的化學(xué)組成。多抗是多種種類和亞類Ig的混合物。2.穩(wěn)定性。單抗的穩(wěn)定較差,對PH變化敏感,對熱不穩(wěn)定,提純過程中易變性,而多抗的穩(wěn)定性則較好。3.特異性。單抗是單一地針對抗原的某一決定簇,所以用它進(jìn)行血清學(xué)反應(yīng)時,特異性強(qiáng),敏感性高,一般不發(fā)生交叉反應(yīng)。而多抗能與抗原上的多種抗原決定簇結(jié)合,所以特異性較差,較易引起交叉反應(yīng)。4.重復(fù)性。單抗的重復(fù)性好,而多抗每批都不一樣。5.沉淀反應(yīng)。多抗由于與抗原多價結(jié)合容易形成網(wǎng)絡(luò)樣沉淀,而單抗只與抗原結(jié)合產(chǎn)生二聚體,不能直接形成抗原抗體沉淀物。抗體的保存:抗體儲存容器應(yīng)由不吸附蛋白質(zhì)的材料制成,常用的有聚丙烯,聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如儲存的抗體中蛋白濃度很低(10-100mg/L),就應(yīng)另加隔離蛋白以減少容器對抗體蛋白的吸附,隔離蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。絕大多數(shù)已稀釋的抗體應(yīng)存在4℃-8℃條件下,以免凍融對抗體蛋白產(chǎn)生有害效應(yīng)??贵w原液和已分離的免疫球蛋白組分應(yīng)保存于-20℃條件下,并避免反復(fù)凍融。冷凍的抗體溶液應(yīng)置于室溫中緩慢地解凍,應(yīng)避免用高溫快速解凍。被細(xì)菌污染的抗體常會出現(xiàn)假陽性結(jié)果,應(yīng)將污染的抗體溶液及其他試劑棄之。為防止細(xì)菌污染,可于抗體溶液中加入0.01%疊氮鈉??贵w經(jīng)真空冷凍干燥后置-20℃以下可保存3-5年。保存稀釋后的單抗應(yīng)加入0.1%疊氮鈉濃度。大多數(shù)稀釋抗體可進(jìn)行冷凍保存,少數(shù)抗體可能會丟失抗原活性。大多數(shù)單抗,只要蛋白濃度適當(dāng),可在4℃下保存數(shù)月。[詳細(xì)]
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2018-09-27 10:00
產(chǎn)品樣冊
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GMP基礎(chǔ)知識
- 1、GMP的名詞來源和中文含意是什么?
答:GMP的出現(xiàn)和震驚世界的沙立度胺(thalidomide即反應(yīng)停)藥害事件有關(guān),沙立度胺是一種鎮(zhèn)靜藥。20世紀(jì)50年代后期原聯(lián)邦德國格侖南蘇制藥廠生產(chǎn),當(dāng)時用于ZL孕婦妊娠嘔吐,出售后的6年間,先后在聯(lián)邦德國、日本等28個國家,造成12000多例畸形胎兒,1300例多發(fā)性神經(jīng)炎。美國當(dāng)時沒有批準(zhǔn)進(jìn)口“反應(yīng)停”,基本上沒有受到影響,但此次事件的嚴(yán)重后果在美國引起不安,美國公眾強(qiáng)烈關(guān)注藥品監(jiān)督和藥品法規(guī),導(dǎo)致了國會對《食品、藥品和化妝品法》和重大修改。1962年修訂案在以下三個方面明顯加強(qiáng)了藥品法的執(zhí)行力度:
⑴要求制藥企業(yè)不僅要證明藥品的有效性,而且要證明藥品的安全性。
⑵要求制藥企業(yè)要向FDA報告藥品的不良反應(yīng)。
⑶要求制藥企業(yè)實施藥品生產(chǎn)和質(zhì)量管理規(guī)范。
1963年,美國國會頒布了世界上DY部GMP。
GMP是英文GoodManufacturingPractice的縮寫。直譯為“優(yōu)良的生產(chǎn)實踐”,由于Manufacture一詞包含生產(chǎn)和質(zhì)量管理雙重含意,加之,在國際上GMP已成為藥品生產(chǎn)和質(zhì)量管理的基本準(zhǔn)則,是一套系統(tǒng)的、科學(xué)的管理制度,所[詳細(xì)]
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2021-06-01 17:23
標(biāo)準(zhǔn)
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反應(yīng)釜基礎(chǔ)知識
- 反應(yīng)釜基礎(chǔ)知識[詳細(xì)]
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2024-09-22 10:42
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- 烘箱基礎(chǔ)知識[詳細(xì)]
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2024-09-29 05:53
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- 鎖相放大器基礎(chǔ)知識[詳細(xì)]
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2013-03-28 00:00
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