本文由 德國格哈特分析儀器有限公司 整理匯編

2024-09-28 00:15 458閱讀次數(shù)

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• ELISA試劑盒的洗滌步驟

  ELISA試劑盒的洗滌在ELISA進程中雖不是一個反應(yīng)進程，但卻也決議著實驗的勝敗。ELSIA?是靠洗刷來到達別離游離的和聯(lián)絡(luò)的酶符號物的目的。通過洗刷以根除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體聯(lián)絡(luò)的物質(zhì)，以及在反應(yīng)進程中非特異性地吸附于固相載體的煩擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗刷時又應(yīng)把這種非特異性吸附的煩擾物質(zhì)洗刷下來?？梢哉f在ELISA操作中，洗刷是Z主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)導(dǎo)致操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴厲按懇求洗刷，不得大意。洗刷的方法除某些ELISA儀器配有格外的主動洗刷儀外，手工操作有浸泡式和流水沖刷式兩種，進程如下：浸泡式a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；b.用洗刷液過洗一遍（將洗刷液注滿板孔后，即甩去）；c.浸泡，即將洗刷液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖晃，浸泡時間不可隨意縮短；d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)徹底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清洗毛巾或吸水紙上拍干；e.重復(fù)操作c和d，洗刷3-4次（或按說明規(guī)矩）。ELISA試劑盒在間接法中如本底較高，可增加洗刷次數(shù)或延伸浸泡時間。微量滴定板多選用浸泡式洗刷法。洗刷液多為含非離子型洗刷劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的聯(lián)絡(luò)是疏水性的，非離子型洗刷劑既含疏水基團，也含親水基團，其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵聯(lián)絡(luò)，然后削弱蛋白質(zhì)與固相載體的聯(lián)絡(luò)，并借助于親水基團和水分子的聯(lián)絡(luò)效果，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液情況，然后脫離固相載體。洗刷液中的非離子型洗刷劑通常是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低實驗的靈敏度。流水沖刷式流水沖刷法開端用于小珠載體的洗刷，洗刷液僅為蒸餾水乃至可用自來水。洗刷時附接一格外設(shè)備，使小珠在流水沖擊下不斷地翻滾淋洗，持續(xù)沖刷2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖刷式則比方淋浴，其洗刷效果更為徹底，且也簡潔、敏捷。已有實驗標(biāo)明，流水沖刷式一樣也適用于微量滴定板的洗刷。ELISA試劑盒洗刷時設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗刷效果更佳。[詳細]

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