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轉(zhuǎn)鐵蛋白
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2024-09-29 09:37 537閱讀次數(shù)
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轉(zhuǎn)鐵蛋白
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轉(zhuǎn)鐵蛋白
- 轉(zhuǎn)鐵蛋白[詳細]
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2024-09-29 09:37
期刊論文
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大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)檢測試劑盒
- 大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)檢測試劑盒[詳細]
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2014-09-29 00:00
專利
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人轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)酶聯(lián)免疫分析
- ELISA試劑盒實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)水平。用純化的人轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF),再與HRP標記的轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(1200μmol/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。600μmol/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液300μmol/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液150μmol/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液75μmol/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液37.5μmol/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。ELISA試劑盒注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。ELISA試劑盒保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-09-27 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒
- 大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒[詳細]
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2016-08-03 00:00
實驗操作
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豬轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒
- 豬轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒[詳細]
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2015-05-18 00:00
報價單
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豬轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒
- 豬轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒[詳細]
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2015-05-05 00:00
應用文章
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豬轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com豬轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗豬TFR單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的TFR與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗豬TFR,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,TFR濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中TFR濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標板(CoatedWells)96孔酶標抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標準品(Standards):4000ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本:血清、血漿(EDTA)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復凍融。血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清可能需要稀釋,請先做預實驗,以確定稀釋倍數(shù)。2.標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成4000ng/ml的溶液。設標準管8管,**管加標本稀釋液900ul,第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在**管中加入4000ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應減除空白值后再行計算。2.以標準品400、200、100、50、25、12.5、6.25、0ng/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應TFR含量,再乘上稀釋倍數(shù)。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的TFR檢測濃度小于3ng/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的豬TFR。不與豬其它細胞因子有交叉反應。3.重復性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。注意事項1.以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。2.洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細]
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2018-09-13 10:00
產(chǎn)品樣冊
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轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)ELISA試劑盒分析說明
- 轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)ELISA試劑盒分析說明說明該試劑盒以HRP標記的鏈霉親和素復合物(HRPStreptavidinConjugate,HRP-SA)為基礎,可用于檢測血液,細胞、組織內(nèi)的特異性CD40抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的CD40一抗與相應靶抗原結(jié)合后,用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合,Z后加入HRP-SA,形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復合物,顯微鏡下觀察成像。試劑盒所含試劑:試劑A通透液:0.1%Triton-X10010mL(選用)試劑B封閉緩沖液(封閉用)20mL試劑C(原裝進口分裝)已稀釋的即用型CD40一抗(2.5ml)試劑D(原裝進口分裝)生物素化羊抗兔IgG1支(濃度1.5mg/mL,稀釋比為1:300~1:500)50μL+抗體稀釋液20ml試劑EHRP-SA復合物1支(濃度1μM,稀釋比1:50~1:200)100μL試劑FDAB顯色液5ml用戶自備試劑:1.10mMTBS(pH7.2~7.4)三羥基氨基甲烷1.21g加蒸餾水800mL,濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4,Z后定容至1000mLTBS-T:TBS+Tween20(0.05%體積比)2.抗原修復液(依檢測抗原不同而選擇不同的修復液)10mMpH6.0檸檬酸緩沖檸檬酸0.38g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水900mL,濃鹽酸調(diào)pH值至6.0,Z后定容至1000mL或:0.5MEDTA修復液(pH8.0)EDTA2H2O186.1g蒸餾水700mL,用10mMNaOH調(diào)pH值至8.0,Z后定容至1000Ml3.緩沖甘油封固劑10mL4.Tween205mL石蠟包埋組織切片免疫染色實驗步驟(建議方案):石蠟包埋組織切片3~4μm厚度1.烤片:將待做切片置于切片架上,于60℃恒溫烤箱中至少烤1hr;2.脫蠟:切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10min;3.水化:切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇5min,95%乙醇2次(每次2min),85%乙醇2mi75乙醇2min,自來水沖洗,ddH2O洗2×2min;4.抗原修復:根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到98~100℃)或消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O洗2×2min,TBS洗滌(2×2min)(具體修法見附1)*注:有些抗原勿需修復,直接進入第5步封閉。5.封閉:滴加試劑B,37℃濕盒孵育30min;6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),37℃濕盒孵育2hr;7.洗滌:TBS-T洗滌(3×5min);8.封閉:滴加試劑B,37℃濕盒孵育10min;9.加二抗:滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育30min;10.洗滌:TBS-T洗滌(3×5min);11.封閉:滴加試劑Tween20,37℃濕盒孵育封閉20min;12.加HRP-SA:滴加用試劑C稀釋的試劑E(1:50~200,終濃度5~20nM),37℃濕盒中孵育30min;13.洗滌:TBS-T洗滌(3×5min),TBS洗滌(2×5min);14.顯色:應用DAB溶液(試劑F)顯色;15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;16.封片:待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片17.觀察成像:顯微鏡下觀察成像。注意事項:1.修復后緩沖液須自然冷卻,自來水沖洗后方能把切片取出,驟冷有可能導致結(jié)晶或抗原封閉。2.緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到,用過的檸檬酸緩沖液不能反復使用。3.若試劑為微量濃縮液,用前應低速離心,將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。4.封片前一定要換用TBS充分洗滌,以便洗去組織上殘留的Tween20,否則會影響結(jié)果觀察。5.如須復染細胞核,則在封片前復染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封片。附1:抗原修法常用抗原修復液:檸檬酸緩沖液(0.01MpH6.0)、EDTA抗原修復液(pH8.0或9.0)等等。一、酶消化修復法酶消化修復切片脫蠟水化處理,TBS沖洗,在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。二、微波抗原修復法微波盒中加入抗原修復液微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,中檔或繼續(xù)微波10~15min,取出微波盒冷卻至室溫后,自來水沖洗,取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異,須自行調(diào)整。三、直接高壓抗原修復法取修復液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰,將組織切片置于耐高溫切片架上,修復液沸騰后放入切片架,蓋上鍋蓋,待噴氣后計時1.5~2.5min即可脫離熱源,自然冷卻至室溫后自來水沖洗,取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。四、隔水式高壓抗原修復法不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰,微波盒中加入修復液于微波爐中加熱至沸騰,將切片放入微波盒中,再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋,待噴氣后計時4~8min即可關閉熱源,自然冷卻至室溫后自來水沖洗,取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。[詳細]
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2024-09-28 13:11
產(chǎn)品樣冊
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人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)檢測試劑盒
- 人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)檢測試劑盒[詳細]
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2024-09-27 23:54
課件
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大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)檢測試劑盒
- 大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)檢測試劑盒[詳細]
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2024-09-20 03:55
報價單
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人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)ELISA試劑盒
- 人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)ELISA試劑盒[詳細]
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2024-09-29 12:47
操作手冊
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小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒
- 小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒[詳細]
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2013-12-09 00:00
選購指南
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人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒
- 人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒[詳細]
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2013-12-06 00:00
操作手冊
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人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR)ELISA試劑盒
- 人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR)ELISA試劑盒[詳細]
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2013-12-05 00:00
產(chǎn)品樣冊
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人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)檢測試劑盒
- 人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)檢測試劑盒[詳細]
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2015-03-10 00:00
其它
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人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR)ELISA試劑盒
- 人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR)ELISA試劑盒[詳細]
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2024-09-28 14:24
選購指南
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人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒
- 人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒[詳細]
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2024-09-28 23:21
實驗操作
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大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒
- 大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒[詳細]
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2024-09-20 21:06
產(chǎn)品樣冊
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人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR)檢測試劑盒
- 人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR)檢測試劑盒[詳細]
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2024-09-20 00:20
選購指南
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大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)檢測試劑盒
- 大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)檢測試劑盒[詳細]
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2024-09-29 04:17
期刊論文
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