本文由 上海高創(chuàng)化學(xué)科技有限公司 整理匯編

2013-09-23 00:00 204閱讀次數(shù)

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  小鼠水通道蛋白-4（AQP-4）ELISA試劑盒（用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi)）原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗小鼠AQP-4單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的AQP-4與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗小鼠AQP-4，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，Z后加終止液，在450nm處測(cè)OD值，AQP-4濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中AQP-4濃度。試劑盒組成（2-8℃保存）酶標(biāo)板（CoatedWells）96孔酶標(biāo)抗體工作液（EnzymeConjugate）12ml10×標(biāo)本稀釋液（SampleBuffer）12ml20×濃縮洗滌液（WashBuffer）50ml標(biāo)準(zhǔn)品（Standards）：10ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗體工作液（BiotinylatedAntibody）12ml終止液（StopSolution）12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、尿液等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融。血清測(cè)定前用標(biāo)本稀釋液作1：5稀釋（取40ul，加標(biāo)本稀釋液160ul,稀釋5倍）。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml蒸餾水混勻，配成20ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管，**管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。4.洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）檢測(cè)程序1.加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板：同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)AQP-4含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度：Z小的AQP-4檢測(cè)濃度小于8pg/ml。2.特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的小鼠AQP-4。不與小鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于11％。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！[詳細(xì)]

  2018-09-13 10:01

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  2018-09-13 10:01

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  2015-01-30 00:00

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• 大鼠水通道蛋白4(AQP-4) elisa試劑盒使用說明書

  大鼠水通道蛋白4(AQP-4) elisa試劑盒使用說明書[詳細(xì)]

  2024-10-08 05:30

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• 人 （Human） 水通道蛋白-4 （AQP-4） ELISA 檢測(cè)試劑盒說明書

  人（Human）水通道蛋白-4（AQP-4）ELISA檢測(cè)試劑盒　　　　　　　　　　　　　　　本試劑僅供研究使用試驗(yàn)原理：　　　　AQP-4試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知AQP-4濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將AQP-4和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中AQP-4的濃度呈比例關(guān)系。　　　　試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品：16ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說明書進(jìn)行稀稀空白對(duì)照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶（4.0ml）1瓶（2.0ml）即用型生物素標(biāo)記的抗AQP-4抗體1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型親和鏈酶素-HRP1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）即用型洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說明書進(jìn)行稀釋底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型標(biāo)本稀釋液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自備材料蒸餾水。加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。振蕩器及磁力攪拌器等。安全性避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項(xiàng)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：16ng/ml（6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。8.0ng/ml（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液4.0ng/ml（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.0ng/ml（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.0ng/ml（2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0.5ng/ml（1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0ng/ml（空白對(duì)照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。操作步驟使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入60ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。建議使用的實(shí)驗(yàn)方案標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）A1616樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B8.08.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C4.04.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D2.02.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E1.01.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F0.50.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到極ng確的結(jié)果。試劑盒性能1.靈敏度：Z小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。結(jié)果判斷與分析1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的AQP-4標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的AQP-4含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測(cè)值范圍：0-16ng/ml4、敏感度：0.01ng/ml[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 小鼠水通道蛋白4（AQP-4）ELISA試劑盒elisa試劑盒使用說明書

  上海一基實(shí)業(yè)有限公司主要生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品，實(shí)驗(yàn)室耗材等。同時(shí)代理美國(guó)、日本、英國(guó)，德國(guó)等國(guó)家的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)樣品。本著標(biāo)準(zhǔn)**、質(zhì)量**，服務(wù)**，信譽(yù)**的宗旨，為客戶提供售前.售中.售后的優(yōu)質(zhì)服務(wù)。我公司全體工作人員真誠(chéng)的歡迎國(guó)內(nèi)外客戶的大力支持與合作。業(yè)務(wù)范圍：a,銷售中檢所、自制標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品及進(jìn)口試劑b,承接克級(jí)至公斤級(jí)高純度單體的定制業(yè)務(wù)c,承接中藥單體/標(biāo)準(zhǔn)品新品研發(fā)業(yè)務(wù)上海一基實(shí)業(yè)有限公司是國(guó)內(nèi)生物試劑權(quán)威的供應(yīng)商之一，專業(yè)經(jīng)銷生物科學(xué)領(lǐng)域的知名品牌。自公司成立以來，本著始終擁有的創(chuàng)業(yè)激情，公司的銷售額保持高速增長(zhǎng)，企業(yè)規(guī)模不斷擴(kuò)大，生產(chǎn)加工和銷售的產(chǎn)品包括各種化學(xué)試劑、生化試劑、培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)室儀器及耗材等5萬余種類。產(chǎn)品銷往全國(guó)各地，客戶遍布國(guó)內(nèi)廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位。以真誠(chéng)、主動(dòng)、周到、規(guī)范、熱情的服務(wù)很快得到廣大客戶的一致好評(píng)。我們的目標(biāo)是建成集生產(chǎn)加工和銷售于一體的yi流的化學(xué)品生產(chǎn)銷售企業(yè)。我們將充分發(fā)揮我們的技術(shù)、設(shè)備、人才的優(yōu)勢(shì)。公司秉承“適應(yīng)多樣化的需求，提供專業(yè)化的服務(wù)”的經(jīng)營(yíng)理念，為客戶提供全方位的服務(wù)。歡迎社會(huì)各界朋友前來洽談業(yè)務(wù)，共創(chuàng)輝煌！企業(yè)目標(biāo)----建成集生產(chǎn)加工和銷售于一體的國(guó)內(nèi)外知名的yi流的大型生產(chǎn)銷售企業(yè)！企業(yè)價(jià)值觀----超越自我，追求zhuo越。員工行為準(zhǔn)則----真誠(chéng)、主動(dòng)、周到、規(guī)范、熱情。[詳細(xì)]

  2018-09-25 10:08

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 小鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISA試劑盒

  小鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2013-12-09 00:00

  應(yīng)用文章

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• 小鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISA試劑盒

  小鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2013-12-09 00:00

  實(shí)驗(yàn)操作

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• 人水通道蛋白5(AQP5)ELISA試劑盒

  人水通道蛋白5(AQP5)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2015-03-18 00:00

  選購(gòu)指南

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• 人水通道蛋白1(AQP1)ELISA試劑盒

  人水通道蛋白1(AQP1)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2015-03-18 00:00

  選購(gòu)指南

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• 人水通道蛋白9(AQP9)ELISA試劑盒

  人水通道蛋白9(AQP9)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2015-03-18 00:00

  操作手冊(cè)

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