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豬瘟抗體(CSF-Ab)ELISA檢測試劑盒說明書

本文由 上海心語生物科技有限公司 整理匯編

2019-01-02 10:00 455閱讀次數(shù)

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豬瘟抗體(CSF-Ab)ELISA檢測試劑盒實驗原理本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中豬瘟抗體(CSF-Ab)表達。用純化的豬瘟抗原包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中豬瘟抗體(CSF-Ab)相結合,經(jīng)洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的豬瘟抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中豬瘟抗體(CSF-Ab)的存在與否。豬瘟抗體(CSF-Ab)ELISA檢測試劑盒操作步驟1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。豬瘟抗體(CSF-Ab)ELISA檢測試劑盒計算和結果判定:試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10臨界值(CUTOFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定:樣品OD值<臨界值(CUTOFF)者為豬瘟抗體(CSF-Ab)陰性陽性判定:樣品OD值≥臨界值(CUTOFF)者為豬瘟抗體(CSF-Ab)陽性

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