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PCR反應(yīng)污染源的排查
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本文由 上海領(lǐng)成生物科技有限公司 整理匯編
2024-09-28 00:26 273閱讀次數(shù)
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PCR反應(yīng)污染源的排查
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2013-12-04 00:00
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- 沉淀反應(yīng)（precipitationreaction）是指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在適當(dāng)條件下發(fā)生特異性結(jié)合而出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象。早在1897年Kraus發(fā)現(xiàn)細(xì)菌培養(yǎng)液與相應(yīng)抗血清混合時可出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。1905年Bechhold把抗體放在明膠中，再將抗原加于其上，發(fā)現(xiàn)沉淀反應(yīng)可在凝膠中進(jìn)行。1946年Ou出n報告了試管免疫擴(kuò)散技術(shù)，到1965年Mancini建立了單向免疫擴(kuò)散技術(shù)，這就使得定性免疫試驗逐步向定量化發(fā)展。20世紀(jì)70年代免疫濁度法的出現(xiàn)使沉淀反應(yīng)適應(yīng)了現(xiàn)代測定快速、簡便和自動化的要求，開創(chuàng)了免疫化學(xué)定量檢測的新紀(jì)元。根據(jù)沉淀反應(yīng)介質(zhì)和檢測方法的不同。將其分為液體內(nèi)沉淀試驗、凝膠內(nèi)沉淀試驗和凝膠免疫電泳試驗三大基本類型。沉淀反應(yīng)中抗原抗體結(jié)合的特性與經(jīng)典的抗原抗體反應(yīng)相同。沉淀反應(yīng)分兩個階段，**階段為抗原抗體特異性結(jié)合，在幾秒鐘到幾十秒鐘內(nèi)可以完成并出現(xiàn)可溶性復(fù)合物，快速但不可見。此階段主要受抗原抗體特異性和結(jié)合力的影響。免疫比濁法中的速率法就是利用此階段測定免疫復(fù)合物形成的速率。第二階段則形成可見的免疫復(fù)合物，約需幾十分鐘到數(shù)小時完成，經(jīng)典的沉淀反應(yīng)是觀察此階段形成的沉淀線或沉淀環(huán)來判斷結(jié)果。此階段受抗原抗體比例、分子大小、濃度、親和力及電解質(zhì)濃度和反應(yīng)溫度的影響。免疫比濁法中的終點法也是測定此階段形成的復(fù)合物的量。關(guān)于抗原抗體結(jié)合后如何聚集形成復(fù)合物而沉淀，可用網(wǎng)絡(luò)學(xué)說（1atticetheory）解釋，即大多數(shù)抗體為兩價，天然抗原為多價，二者可相互交聯(lián)成具有立體結(jié)構(gòu)的巨大網(wǎng)格狀聚集體，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物。多克隆抗體可與抗原表面多表位結(jié)合，很容易交聯(lián)成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)而發(fā)生沉淀，因此多克隆抗體非常適用于免疫沉淀反應(yīng)，而單克隆抗體只與抗原的一種表位結(jié)合，不易形成交聯(lián)，故一般不適用于免疫沉淀反應(yīng)。[詳細(xì)]
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2018-09-27 10:00
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