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大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)說明書定性
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本文由 上海瓦蘭生物科技有限公司 整理匯編
2018-09-22 10:00 325閱讀次數(shù)
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www.biokanu.com大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血液,血清及相關(guān)液體樣本中膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)水平。實驗原理:本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定標本中大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)。用純化的大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)存在與否。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存陰性對照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存陽性對照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。結(jié)果判定:試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10臨界值(CUTOFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定:樣品OD值<臨界值(CUTOFF)者為膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)陰性陽性判定:樣品OD值≥臨界值(CUTOFF)者為膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)陽性注意事項1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。5.底物請避光保存。6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月
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大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)說明書定性
- www.biokanu.com大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血液,血清及相關(guān)液體樣本中膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)水平。實驗原理:本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定標本中大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)。用純化的大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)存在與否。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存陰性對照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存陽性對照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。結(jié)果判定:試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10臨界值(CUTOFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定:樣品OD值<臨界值(CUTOFF)者為膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)陰性陽性判定:樣品OD值≥臨界值(CUTOFF)者為膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)陽性注意事項1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。5.底物請避光保存。6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-09-22 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7A1)說明書活性
- www.biokanu.com大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7A1)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中膽固醇7α-羥化酶(CYP7A1)的活性。實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7A1)水平。用純化的大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7A1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入膽固醇7α-羥化酶(CYP7A1),再與HRP標記的羊抗鼠抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膽固醇7α-羥化酶(CYP7A1)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠膽固醇7α-羥化酶(CYP7A1)活性濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品:72U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為48U/L,32U/L,16U/L,8U/L,4U/L)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。注意事項:1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。2.批內(nèi)與批見應分別小于9%和11%檢測范圍:2U/L60U/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-09-22 10:00
產(chǎn)品樣冊
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魚膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)elisa試劑盒說明書
- 魚膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定魚血清,血漿及相關(guān)液體樣本中膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)的活性。實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中魚膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)水平。用純化的魚膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1),再與HRP標記的膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中魚膽固醇7α-羥化酶(CYP7a1)濃度。[詳細]
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2018-09-03 10:00
產(chǎn)品樣冊
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CYP7A1供應商,豬膽固醇7α羥化酶價格,ELISA試劑盒說明書
- CYP7A1供應商,豬膽固醇7α羥化酶價格,ELISA試劑盒說明書l本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中豬膽固醇7α羥化酶(CYP7A1)的含量。l有效期:6個月l保存條件:2-8℃l本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷實驗原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被豬膽固醇7α羥化酶(CYP7A1)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬膽固醇7α羥化酶(CYP7A1)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。樣本處理及要求1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心20分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。3.組織勻漿:用預冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶YZ劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。Z后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。4.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。注:標本溶血會影響Z后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。標本處理1.本公司只對試劑盒本身負責,不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責,請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預留充足的樣本。2.實驗前應預測標本含量,如果標本濃度過高,應對標本進行稀釋,使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。標本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。3.若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進行預實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。4.使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致ELISA實驗結(jié)果偏差。5.若樣本為細胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。6.某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。7.建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結(jié)果偏差。需要而未提供的試劑和器材酶標儀(450nm)高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱蒸餾水或去離子水注意事項嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。在儲存和溫育時避免強光直接照射。平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。不能使用過期產(chǎn)品。如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。試劑準備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。實驗結(jié)果計算以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。試劑盒性能1.檢測范圍:0.75U/L24U/L。2.靈敏度:Zdi檢測濃度小于0.1U/L。3.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。4.重復性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。說明1.由于現(xiàn)有條件及科學技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風險。2.Z終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務必準備充足的標本備份。3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到**的檢測結(jié)果。[詳細]
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2018-11-16 10:02
產(chǎn)品樣冊
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大鼠膽固醇合成酶(HMG-COA)說明書定性
- www.biokanu.com大鼠膽固醇合成酶(HMG-COA)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血液,血清及相關(guān)液體樣本中膽固醇合成酶(HMG-COA)水平。實驗原理:本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定標本中大鼠膽固醇合成酶(HMG-COA)。用純化的大鼠膽固醇合成酶(HMG-COA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中膽固醇合成酶(HMG-COA)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的膽固醇合成酶(HMG-COA)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中大鼠膽固醇合成酶(HMG-COA)存在與否。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存陰性對照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存陽性對照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。結(jié)果判定:試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10臨界值(CUTOFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定:樣品OD值<臨界值(CUTOFF)者為膽固醇合成酶(HMG-COA)陰性陽性判定:樣品OD值≥臨界值(CUTOFF)者為膽固醇合成酶(HMG-COA)陽性注意事項1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。5.底物請避光保存。6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-09-22 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠膽固醇(CH)說明書
- www.biokanu.com大鼠膽固醇(CH)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中膽固醇(CH)的含量。實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠膽固醇(CH)水平。用純化的大鼠膽固醇(CH)抗體包被微孔板,往微孔中依次加入膽固醇(CH),再與HRP標記的膽固醇(CH)抗體結(jié)合,形成免疫復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膽固醇(CH)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠膽固醇(CH)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品:27pmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為18pmol/L,12pmol/L,6pmol/L,3pmol/L,1.5pmol/L)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。注意事項:1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)與批見應分別小于9%和11%檢測范圍:1pmol/L-20pmol/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-09-22 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(ACAT-2) 說明書
- www.biokanu.com大鼠膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(ACAT-2)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿,細胞上清及相關(guān)液體樣本中膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(ACAT-2)的活性。實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(ACAT-2)水平。用純化的大鼠膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(ACAT-2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(ACAT-2),再與HRP標記的膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(ACAT-2)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(ACAT-2)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(ACAT-2)活性濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品:180IU/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為120IU/L,80IU/L,40IU/L,20IU/L,10IU/L)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。注意事項:1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。2.批內(nèi)與批見應分別小于9%和11%檢測范圍:8IU/L-150IU/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-09-22 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠 (Rat) 脯氨酸羥化酶 (PHD) ELISA檢測試劑盒說明書
- 本試劑僅供研究使用ELISA檢測試劑盒試驗原理:PHD試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知PHD濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將PHD和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中PHD的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標準品:800ng/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進行稀稀空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型標準品稀釋緩沖液1瓶(4.0ml)1瓶(2.0ml)即用型生物素標記的抗PHD抗體1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型親和鏈酶素-HRP1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)即用型洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進行稀釋底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型標本稀釋液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型自備材料蒸餾水。加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。振蕩器及磁力攪拌器等。安全性避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。ELISA檢測試劑盒操作注意事項試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準備標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:800ng/ml(6號標準品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。400ng/ml(5號標準品)100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液200ng/ml(4號標準品)100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液100ng/ml(3號標準品)100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液50ng/ml(2號標準品)100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液25ng/ml(1號標準品)100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液0ng/ml(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。操作步驟使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內(nèi)。加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入60ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結(jié)果。在450nm波長處測定各孔的OD值。建議使用的實驗方案標準品濃度(ng/ml)A800800樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B400400樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C200200樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D100100樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E5050樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F2525樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6號標準品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到極ng確的結(jié)果。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性:不與其它細胞因子反應。3.重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。結(jié)果判斷與分析1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的PHD標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的PHD含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。3、ELISA檢測試劑盒檢測值范圍:0-800ng/ml4、敏感度:1.0ng/ml[詳細]
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2018-09-27 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠總膽固醇(TC)ELISA試劑盒使用說明書
- 大鼠總膽固醇(TC)ELISA試劑盒使用說明書[詳細]
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2015-06-12 00:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠膽固醇(CH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
- 大鼠膽固醇(CH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書[詳細]
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2016-05-06 00:00
期刊論文
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大鼠24S-羥基膽固醇ELISA試劑盒使用說明書
- 檢測范圍:96T1pg/ml-60pg/ml使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中24S-羥基膽固醇含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠24S-羥基膽固醇水平。用純化的大鼠24S-羥基膽固醇抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入24S-羥基膽固醇,再與HRP標記的24S-羥基膽固醇抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的24S-羥基膽固醇呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠24S-羥基膽固醇濃度。[詳細]
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2018-09-19 10:01
產(chǎn)品樣冊
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大鼠膽固醇(CH)酶聯(lián)免疫分析
- 大鼠膽固醇(CH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T0.7nmol/L-45nmol/L使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中膽固醇(CH)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠膽固醇(CH)水平。用純化的大鼠膽固醇(CH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入膽固醇(CH),再與HRP標記的膽固醇(CH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膽固醇(CH)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠膽固醇(CH)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(64nmol/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。32nmol/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液16nmol/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液8nmol/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液4nmol/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液2nmol/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-11-16 10:02
產(chǎn)品樣冊
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大鼠酪氨酸羥化酶(TH)ELISA檢測試劑盒
- www.biokanu.com本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫(yī)學診斷大鼠酪氨酸羥化酶(TH)ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被大鼠酪氨酸羥化酶(TH)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠酪氨酸羥化酶(TH)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。3.細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品酶標儀(450nm)高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱操作注意事項試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白;預處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無標準品(320pmol/mL)0.6mL0.6mL按說明書進行稀釋標準品稀釋液6mL3mL無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:320、160、80、40、20、10pmol/mL試劑的準備20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。操作步驟從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。結(jié)果判斷繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。試劑盒性能1.準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。2.靈敏度:Zdi檢測濃度小于1.0pmol/mL。3.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。4.重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。5.貯藏:2-8℃,避光防潮保存。6.有效期:6個月免責聲明1.試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。2.嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。[詳細]
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2018-09-22 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠總膽固醇(TC)酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說明書
- 使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中總膽固醇(TC)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠總膽固醇(TC)水平。用純化的大鼠總膽固醇(TC)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入總膽固醇(TC),再與HRP標記的總膽固醇(TC)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總膽固醇(TC)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠總膽固醇(TC)濃度。[詳細]
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2018-10-08 10:01
產(chǎn)品樣冊
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大鼠趨化因子受體7(CCR7)ELISA試劑盒說明書
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com大鼠趨化因子受體7(CCR7)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和尿液生物體液內(nèi))原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗大鼠CCR7單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的CCR7與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗大鼠CCR7,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,CCR7濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中CCR7濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標板(CoatedWells)96孔酶標抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標準品(Standards):10ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本:血清、血漿(肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復凍融。2.標準品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成20ng/ml的溶液。設(shè)標準管8管,**管加標本稀釋液900ul,第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應減除空白值后再行計算。2.以標準品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應CCR7含量即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的CCR7檢測濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的大鼠CCR7。不與大鼠其它細胞因子有交叉反應。3.重復性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。注意事項1.以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細]
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2018-09-13 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠總膽固醇(TC)檢測試劑盒
- 大鼠總膽固醇(TC)檢測試劑盒[詳細]
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2014-09-29 00:00
選購指南
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大鼠骨成型蛋白-7(BMP-7)ELISA試劑盒說明書
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com大鼠骨成型蛋白-7(BMP-7)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和生物體液內(nèi))原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗大鼠BMP-7單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的BMP-7與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗大鼠BMP-7,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,BMP-7濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中BMP-7濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標板(CoatedWells)96孔酶標抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標準品(Standards):2ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復凍融。2.標準品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成4000pg/ml的溶液。設(shè)標準管8管,每管加入標本稀釋液200ul。在**管中加入4000pg/ml的標準品溶液200ul混勻后用加樣器吸出200ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出200ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應減除空白值后再行計算。2.以標準品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應BMP-7含量。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的BMP-7檢測濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的大鼠BMP-7。不與大鼠其它細胞因子有交叉反應。3.重復性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10.2%。注意事項1.以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細]
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2018-09-13 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人17a-羥化酶(CYP17)ELISA試劑盒說明書
- 人17a-羥化酶(CYP17)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和尿液生物體液內(nèi))原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人CYP17單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的CYP17與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人CYP17,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍色,Z后加終止液,在450nm處測OD值,CYP17濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中CYP17濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標板(CoatedWells)96孔酶標抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標準品(Standards):5μmol/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、尿液等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復凍融。2.標準品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成10mmol的溶液。設(shè)標準管8管,**管加標本稀釋液900ul,第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在**管中加入10mmol的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應減除空白值后再行計算。2.以標準品1000、500、250、125、62.5、31.2、15.6、0μmol為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應CYP17含量即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的CYP17檢測濃度小于8μmol。2.特異性:可同時檢測重組或天然的人CYP17。不與人其它細胞因子有交叉反應。3.重復性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10.6%。注意事項1.以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應同時做標準曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細]
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2018-09-13 10:01
產(chǎn)品樣冊
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植物黃烷酮-3-羥化酶試劑盒說明書
- 植物黃烷酮-3-羥化酶(Flavanone-3-hydroxylase;F3H)活性酶連續(xù)反應光度法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途植物黃烷酮-3-羥化酶(Flavanone-3-hydroxylase;F3H)活性酶連續(xù)反應光度法定量檢測試劑是一種旨在使用黃烷酮-3-羥化酶、琥珀酸輔酶A合成酶、丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應系統(tǒng),伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的氧化反應,即采用光度法測定其氧化后峰值(NADH濃度)的變化,以此進行測算單位酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種植物組織,包括種子(seed)、葉片(leaf)、根(root)、胚胎葉(cotyledon)、上胚軸(epicotyl)等黃烷酮-3-羥化酶的活性檢測。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,反應優(yōu)化,檢測敏感。技術(shù)背景黃烷酮-3-羥化酶(Flavanone-3-hydroxylase;F3H;EC1.14.11.9),又稱為黃烷酮-3-雙加氧酶(Flavanone-3-dioxygenase),全稱為黃烷酮-2-酮戊二酸:氧分子氧化還原酶(3-羥基化)(flavanone-2-oxoglutarate:oxygenoxidoreductase(3-hydroxylating)),屬于氧化還原酶家族中一員,為可溶性非亞鐵血紅素性含鐵2酮戊二酸依賴性雙加氧酶(2-oxo-glutaratedependentdioxygenase;2-ODD),單體蛋白,催化黃烷酮,例如2S柚皮素(2Snaringenin)的立體選擇性羥基化反應(stereospecifichydroxylation)為2R,3R二氫黃酮醇類(dihydroflavonol),例如2R,3R二氫山柰酚(2R,3Rdihydrokaempferol;DHK),是生物合成黃酮類、花青素(anthocyanidins)、兒茶素(catechins)等化合物的關(guān)鍵步驟,,從而調(diào)節(jié)類黃酮通路。基于底物柚皮素受到黃烷酮-3-羥化酶的催化,獲得氧化,同時分解2-酮戊二酸,產(chǎn)生二氫山柰酚和琥珀酸,進而通過琥珀酸輔酶A合成酶(SuccinylCoAsynthetase)、丙酮酸激酶(pyruvatekinase;PK)和乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase;LDH)反應系統(tǒng)中,由還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotide;NAD),所產(chǎn)生的峰值變化(340nm),來定量分析黃烷酮-3-羥化酶的活性。其反應系統(tǒng)為:Flavanone-3-hydroxylaseNaringenin+2-oxoglutarate+O2→dihydrokaempterol+succinate+CO2SuccinylCoAsynthetaseSuccinate+CoA+ATP→SuccinylCoA+Pi+ADPpyruvatekinasePhosphoenolpyruvate+ADP→pyruvate+ATPlactatedehydrogenasepyruvate+NADH→lactate+NAD+(高吸收峰)(低吸收峰)產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)60毫升裂解液(ReagentB)20毫升緩沖液(ReagentC)20毫升酶促液(ReagentD)400微升反應液(ReagentE)2毫升底物液(ReagentF)2毫升陰性液(ReagentG)1毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存清理液(ReagentA)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里,避免反復凍融;底物液(ReagentF),避免光照,有效保證6月[詳細]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠膽固醇(CH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明
- 本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T0.7nmol/L-45nmol/L使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中膽固醇(CH)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠膽固醇(CH)水平。用純化的大鼠膽固醇(CH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入膽固醇(CH),再與HRP標記的膽固醇(CH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膽固醇(CH)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠膽固醇(CH)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(64nmol/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。[詳細]
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2018-10-03 10:00
產(chǎn)品樣冊
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