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小鼠熱休克因子1(HSF1)檢測試劑盒
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本文由 上海信裕生物科技有限公司 整理匯編
2015-07-31 00:00 241閱讀次數
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小鼠熱休克因子1(HSF1)檢測試劑盒
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小鼠熱休克因子1(HSF1)檢測試劑盒
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- 熱休克轉錄因子1(HSF1)ELISA試劑盒說明書本試劑僅供研究使用標本:體液熱休克轉錄因子1(HSF1)ELISA試劑盒試驗原理:BFGF試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知BFGF濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將BFGF和生物素標記的抗體同時溫育。人堿性成纖維細胞生長因子ELISA檢測試劑盒洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中BFGF的濃度呈比例關系。熱休克轉錄因子1(HSF1)ELISA試劑盒自備材料1.蒸餾水。2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。3.振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。2.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。熱休克轉錄因子1(HSF1)ELISA試劑盒操作注意事項1.試劑應按標簽儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。2.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。3.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。7.底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。8.加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。9.按照中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。熱休克轉錄因子1(HSF1)ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準備標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。熱休克轉錄因子1(HSF1)ELISA試劑盒操作步驟1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。4.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。6.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。9.在450nm波長處測定各孔的OD值。局限6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到極ng確的結果。熱休克轉錄因子1(HSF1)ELISA試劑盒性能1.靈敏度:Z小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。2.特異性:不與其它細胞因子反應。3.重復性:板內、板間變異系數均小于10%。熱休克轉錄因子1(HSF1)ELISA試劑盒結果判斷與分析1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的BFGF標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的BFGF含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。3、檢測值范圍:0-800pg/ml4、敏感度:1.0pg/mlVA植物維生素A規(guī)格:48T/96TPG植物磷脂酰甘油規(guī)格:48T/96TPA植物磷脂酸規(guī)格:48T/96TABA植物激素脫落酸規(guī)格:48T/96TCAM植物鈣調素規(guī)格:48T/96TOH植物25羥基維生素D3規(guī)格:48T/96TPV魚卵黃高磷蛋白規(guī)格:48T/96TMHC魚類主要組織相容性復合體規(guī)格:48T/96TT3魚類三碘甲狀腺原氨酸規(guī)格:48T/96TCortisol魚類皮質醇規(guī)格:48T/96TT4魚類甲狀腺素規(guī)格:48T/96TGnRH魚類促性腺激素釋放激素規(guī)格:48T/96Ths-CRP魚類超敏C反應蛋白規(guī)格:48T/96TIL-1β魚類白介素1β規(guī)格:48T/96TIL-1α魚類白介素1α規(guī)格:48T/96TOT/BGP魚骨鈣素/骨谷氨酸蛋白規(guī)格:48T/96TGHRH羊促生長激素釋放激素規(guī)格:48T/96TCA鴨子碳酸酐酶規(guī)格:48T/96TMHC鴨主要組織相容性復合體規(guī)格:48T/96TIgE鴨免疫球蛋白E規(guī)格:48T/96TaPT1/aPT2鴨抗凝血素抗體規(guī)格:48T/96TDEV鴨病毒性腸炎病毒規(guī)格:48T/96T[詳細]
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2015-05-18 00:00
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- 大鼠熱休克60酶聯免疫分析試劑盒本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T1.5ng/L-50ng/L使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關液體樣本中熱休克60(Hsp-60)含量。大鼠熱休克60酶聯免疫分析試劑盒實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠熱休克60(Hsp-60)。用純化的大鼠熱休克克60(Hsp-60)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入熱休60(Hsp-60),再與HRP標記的熱休克60(Hsp-60)抗體,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并60(Hsp-60)呈正相關。在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的熱休克用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠熱休克60(Hsp-60)濃度。試劑盒組成30倍濃20ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8條6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶終止液6ml×1瓶0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶1份2酶標試劑標準品(96ng/L)標準品稀釋液3酶標包被板4樣品稀釋液5顯色劑A液6顯色劑B液10說明書11封板膜12密封袋2張1個標本要1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。48ng/L24ng/L12ng/L6ng/L5號標準品4號標準品3號標準品2號標準品1號標準品150l的原倍標準品加入150l標準品稀釋液150l的5號標準品加入150l標準品稀釋液150l的4號標準品加入150l標準品稀釋液150l的3號標準品加入150l標準品稀釋液150l的2號標準品加入150l標準品稀釋液3ng/L2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50l,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l,然后再加待測樣品10l(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后37℃溫育30分鐘。20倍稀釋后備用配液:將20倍濃洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜重復5次,拍干。30秒后棄去,如此加酶:每孔加入酶標試劑50l,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(此時藍色立轉黃色)。11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。操作程序總:計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。大鼠熱休克60酶聯免疫分析試劑盒注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有析出,稀釋時可在浴中加溫助溶,洗滌時不影響。3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗。8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-11-05 10:00
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小鼠血小板因子3(PF-3)檢測試劑盒
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2015-07-31 00:00
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人YZ因子1(MPIF-1/CCL23)檢測試劑盒
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2015-03-17 00:00
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2015-06-05 00:00
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2015-05-22 00:00
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2016-04-25 00:00
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2013-12-09 00:00
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2015-08-10 00:00
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2015-08-28 00:00
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2015-08-04 00:00
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小鼠心肌轉錄因子GATA3 檢測試劑盒說明
- 小鼠心肌轉錄因子GATA3檢測試劑盒說明書該試劑盒以HRP標記的鏈霉親和素復合物(HRPStreptavidinConjugate,HRP-SA)為基礎,可用于檢測血液,細胞、組織內的特異性CD40抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的CD40一抗與相應靶抗原結合后,用生物化二抗與一抗特異性結合,Z后加入HRP-SA,形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復合物,顯微鏡下觀察成像。小鼠心肌轉錄因子GATA3檢測試劑盒所含試劑:試劑A通透液:0.1%Triton-X10010mL(選用)試劑B封閉緩沖液(封閉用)20mL試劑C(原裝進口分裝)已稀釋的即用型CD40一抗(2.5ml)試劑D(原裝進口分裝)生物素化羊抗兔IgG1支(濃度1.5mg/mL,稀釋比為1:300~1:500)50μL+抗體稀釋液20ml試劑EHRP-SA復合物1支(濃度1μM,稀釋比1:50~1:200)100μL試劑FDAB顯色液5ml用戶自備試劑:1.10mMTBS(pH7.2~7.4)三羥基氨基甲烷1.21g氯化鈉7.6g加蒸餾水800mL,濃鹽酸調pH值至7.2~7.4,Z后定容至1000mLTBS-T:TBS+Tween20(0.05%體積比)2.抗原修復液(依檢測抗原不同而選擇不同的修復液)10mMpH6.0檸檬酸緩沖液檸檬酸0.38g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水900mL,濃鹽酸調pH值至6.0,Z后定容至1000mL或:0.5MEDTA修復液(pH8.0)EDTA2H2O186.1g加蒸餾水700mL,用10mMNaOH調pH值至8.0,Z后定容至1000Ml3.緩沖甘油封固劑10mL4.Tween205mL石蠟包埋組織切片免疫染色實驗步驟(建議方案):石蠟包埋組織切片3~4μm厚度1.烤片:將待做切片置于切片架上,于60℃恒溫烤箱中至少烤1hr;2.脫蠟:切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10min;3.水化:切片經下行酒精水化,無水乙醇5min,95%乙醇2次(每次2min),85%乙醇2min;75%乙醇2min,自來水沖洗,ddH2O洗2×2min;4.抗原修復:根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O洗2×2min,TBS洗滌(2×2min)(具體修法見附1)*注:有些抗原勿需修復,直接進入第5步封閉。5.封閉:滴加試劑B,37℃濕盒孵育30min;6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),37℃濕盒孵育2hr7.洗滌:TBS-T洗滌(3×5min);8.封閉:滴加試劑B,37℃濕盒孵育10min;9.加二抗:滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育30min;10.洗滌:TBS-T洗滌(3×5min);11.封閉:滴加試劑Tween20,37℃濕盒孵育封閉20min;12.加HRP-SA:滴加用試劑C稀釋的試劑E(1:50~200,終濃度5~20nM),37℃濕盒中孵育30min;13.洗滌:TBS-T洗滌(3×5min),TBS洗滌(2×5min);14.顯色:應用DAB溶液(試劑F)顯色;15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;16.封片:待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;17.觀察成像:顯微鏡下觀察成像。原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復合物,顯微鏡下觀察成像。小鼠心肌轉錄因子GATA3檢測試劑盒注意事項:1.修復后緩沖液須自然冷卻,自來水沖洗后方能把切片取出,驟冷有可能導致結晶或抗原封閉。2.緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到,用過的檸檬酸緩沖液不能反復使用。3.若試劑為微量濃縮液,用前應低速離心,將內蓋和管壁附著的溶液離到底部。4.封片前一定要換用TBS充分洗滌,以便洗去組織上殘留的Tween20,否則會影響結果觀察。5.如須復染細胞核,則在封片前復染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封片。附1:抗原修法常用抗原修復液:檸檬酸緩沖液(0.01MpH6.0)、EDTA抗原修復液(pH8.0或9.0)等等。一、酶消化修復法酶消化修復切片脫蠟水化處理,TBS沖洗,在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。二、微波抗原修復法微波盒中加入抗原修復液微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,中檔或繼續(xù)微波10~15min,取出微波盒冷卻至室溫后,自來水沖洗,取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異,須自行調整。三、直接高壓抗原修復法取修復液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰,將組織切片置于耐高溫切片架上,修復液沸騰后放入切片架,蓋上鍋蓋,待噴氣后計時1.5~2.5min即可脫離熱源,自然冷卻至室溫后自來水沖洗,取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。四、隔水式高壓抗原修復法不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰,微波盒中加入修復液于微波爐中加熱至沸騰,將切片放入微波盒中,再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋,待噴氣后計時4~8min即可關閉熱源,自然冷卻至室溫后自來水沖洗,取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。[詳細]
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2018-10-09 10:00
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大鼠基質金屬蛋白酶YZ因子1(TIMP-1)檢測試劑盒
- 大鼠基質金屬蛋白酶YZ因子1(TIMP-1)檢測試劑盒[詳細]
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2014-09-29 00:00
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2024-09-17 19:14
專利
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