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為熱熔實(shí)驗(yàn)提供更快的升溫速率——使用 Cary 3500 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)在任意升溫速率下獲得相同結(jié)果

本文由 安捷倫科技(中國(guó))有限公司 整理匯編

2020-05-08 15:38 318閱讀次數(shù)

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升高溫度可誘導(dǎo)雙鏈核酸分離為單鏈。在一定溫度下,堿基對(duì)之間的氫鍵發(fā)生斷 裂。熱熔實(shí)驗(yàn)利用了腺嘌呤-胸腺嘧啶 (A=T) 與鳥(niǎo)嘌呤-胞嘧啶 (GΞC) 核苷酸之間氫鍵 數(shù)的差異。由于 GΞC 核苷酸含有三個(gè)氫鍵,解離所需熱能大于 A=T 對(duì)所需的熱能。 這表示含有更多 GΞC 對(duì)的 DNA 要在更高的溫度下才能熔解。熔解溫度 (Tm) 可指示 樣品中的堿基組成(GΞC 與 A=T 的比例)。制造商和研究人員常將 Tm 用作 QC 校驗(yàn) 指標(biāo)。 使用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定熔點(diǎn),利用的是單鏈核酸在 260 nm 處的吸光度高 于雙鏈核酸的原理。圖 1 顯示了使用小干擾 RNA (siRNA) 樣品的示例,與 25 °C 相 比,85 °C 下 260 nm 處的吸光度明顯更高。

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