本文由 浙江托普云農(nóng)科技股份有限公司 整理匯編

2011-12-08 00:00 442閱讀次數(shù)

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• 丙烯酰胺凝膠電泳說(shuō)明書(shū)

  丙烯酰胺凝膠電泳說(shuō)明書(shū)[詳細(xì)]

  2011-12-08 00:00

  應(yīng)用文章

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• 凝膠電泳

  以淀粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等作為支持介質(zhì)的區(qū)帶電泳法稱(chēng)為凝膠電泳。其中聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegelelectrophoresis，PAGE）普遍用于分離蛋白質(zhì)及較小分子的核酸。瓊脂糖凝膠孔徑較大，對(duì)一般蛋白質(zhì)不起分子篩作用，但適用于分離同工酶及其亞型，大分子核酸等應(yīng)用較廣，介紹如下：⒈瓊脂糖凝膠電泳的原理概述瓊脂糖是由瓊脂分離制備的鏈狀多糖。其結(jié)構(gòu)單元是D-半乳糖和3.6-脫水-L-半乳糖。許多瓊脂糖鏈依氫鍵及其它力的作用使其互相盤(pán)繞形成繩狀瓊脂糖束，構(gòu)成大網(wǎng)孔型凝膠。因此該凝膠適合于免疫復(fù)合物、核酸與核蛋白的分離、鑒定及純化。在臨床生化檢驗(yàn)中常用于LDH、CK等同工酶的檢測(cè)。⒉瓊脂糖凝膠電泳分離核酸的基本技術(shù)在一定濃度的瓊脂糖凝膠介質(zhì)中，DNA分子的電泳遷移率與其分子量的常用對(duì)數(shù)成反比；分子構(gòu)型也對(duì)遷移率有影響，如共價(jià)閉環(huán)DNA＞直線(xiàn)DNA＞開(kāi)環(huán)雙鏈DNA。當(dāng)凝膠濃度太高時(shí)，凝膠孔徑變小，環(huán)狀DNA（球形）不能進(jìn)入膠中，相對(duì)遷移率為0，而同等大小的直線(xiàn)DNA（剛性棒狀）可以按長(zhǎng)軸方向前移，相對(duì)遷移率大于0。⑴設(shè)備與試劑：瓊脂糖凝膠電泳分為垂直及水平型兩種。其中水平型可制備低濃度瓊脂糖凝膠，而且制膠與加樣都比較方便，故應(yīng)用比較廣泛。核酸分離一般用連續(xù)緩沖體系，常用的有TBE（0.08mol/lTrisHCl，pH8.5，0.08mol/L硼酸，0.0024mol/lEDTA）和THE（0.04mol/lTrisHCl。pH7.8，0.2mol/L醋酸鈉，0.0018mol/lEDTA）。⑵凝膠制備：用上述緩沖液配制0.5％-0.8％瓊脂糖凝膠溶液，沸水浴或微波爐加熱使之融化，冷至55℃時(shí)加入溴化乙錠（EB）至終濃度為0.5/ml，然后將其注入玻璃板或有機(jī)玻璃板組裝好的模子中，厚度依樣品濃度而定。注膠時(shí)，梳齒下端距玻璃板0.5-1.0mm，待脫凝固后，取出梳子，加入適量電極緩沖液使板膠浸沒(méi)在緩沖液下1mm處。⑶樣品制備與加樣：溶解于TBE或THE內(nèi)的樣品應(yīng)含指示染料（0.025％溴酚藍(lán)或桔黃橙）、蔗糖（10％-15％）或甘油（5％-10％），也可使用2.5％FicoⅡ增加比重，使樣品集中，每齒孔可加樣5-10。⑷電泳：一般電壓為5-15V/cm。對(duì)大分子的分離可用電壓5V/cm。電泳過(guò)程**在低溫條件下進(jìn)行。⑸樣品回收：電泳結(jié)束后在紫外燈下觀察樣品的分離情況，對(duì)需要的DNA分子或特殊片段可從電泳后的凝膠中以不同的方法進(jìn)行回收，如電泳洗脫法：在紫外燈下切取含核酸區(qū)帶的凝膠，將其裝入透析袋（內(nèi)含適量新鮮電泳緩沖液），扎緊透析袋后，平放在水平型電泳槽兩電極之間的淺層緩沖液中，100V電泳2-3小時(shí)，然后正負(fù)電極交換，反向電泳2分鐘，使透析袋上的DNA釋放出來(lái)。吸出含DNA的溶液，進(jìn)行酚抽提、乙醇沉淀等步驟即可完成樣品的回收。其它還有低融點(diǎn)瓊脂糖法、醋酸銨溶液浸出法、冷凍擠壓法等，但各種方法都僅僅有利于小分子量DNA片段（＜1kb）的回收，隨著DNA分子量的增大，回收量顯著下降。[詳細(xì)]

  2018-09-28 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 變性梯度凝膠電泳系統(tǒng)說(shuō)明書(shū)

  變性梯度凝膠電泳系統(tǒng)說(shuō)明書(shū)[詳細(xì)]

  2010-01-04 00:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 凝膠電泳操作注意事項(xiàng)

  凝膠電泳操作注意事項(xiàng)[詳細(xì)]

  2015-05-20 00:00

  標(biāo)準(zhǔn)

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• 等電聚焦凝膠電泳產(chǎn)品樣冊(cè)

  等電聚焦凝膠電泳產(chǎn)品樣冊(cè)[詳細(xì)]

  2016-10-20 09:05

  期刊論文

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• 彗星實(shí)驗(yàn)?zāi)z電泳產(chǎn)品樣冊(cè)

  彗星實(shí)驗(yàn)?zāi)z電泳產(chǎn)品樣冊(cè)[詳細(xì)]

  2024-09-28 21:32

  選購(gòu)指南

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• 丙烯酰胺化學(xué)數(shù)據(jù)

  丙烯酰胺化學(xué)數(shù)據(jù)[詳細(xì)]

  2024-09-28 12:40

  期刊論文

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• 丙烯酰胺含量測(cè)定 液相色譜法

  丙烯酰胺含量測(cè)定 液相色譜法[詳細(xì)]

  2014-11-23 00:00

  實(shí)驗(yàn)操作

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• 丙烯酰胺的氣相色譜分析

  丙烯酰胺的氣相色譜分析[詳細(xì)]

  2024-09-20 02:09

  期刊論文

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• 內(nèi)標(biāo)法丙烯酰胺LC-MS分析

  內(nèi)標(biāo)法丙烯酰胺LC-MS分析[詳細(xì)]

  2024-09-29 06:09

  專(zhuān)利

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• 甲叉雙丙烯酰胺

  甲叉雙丙烯酰胺[詳細(xì)]

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  期刊論文

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  地表水中丙烯酰胺的檢測(cè)[詳細(xì)]

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  專(zhuān)利

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  丙烯酰胺的水相聚合[詳細(xì)]

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  變性梯度凝膠電泳 DGGE 英國(guó)scie-plas產(chǎn)品樣冊(cè)[詳細(xì)]

  2016-10-20 09:05

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  食品中丙烯酰胺的測(cè)定方法[詳細(xì)]

  2008-02-28 00:00

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• 食品中丙烯酰胺的分析檢測(cè)方法

  食品中丙烯酰胺的分析檢測(cè)方法[詳細(xì)]

  2009-12-17 00:00

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• 食品中丙烯酰胺的測(cè)定 GB 5009.2042014

  食品中丙烯酰胺的測(cè)定GB5009.2042014[詳細(xì)]

  2018-08-23 10:00

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• N-異丙基丙烯酰胺的化學(xué)數(shù)據(jù)

  N-異丙基丙烯酰胺的化學(xué)數(shù)據(jù)[詳細(xì)]

  2024-09-29 01:20

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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