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小鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒
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2013-12-09 00:00 150閱讀次數(shù)
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小鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒
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小鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒- 小鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒[詳細]
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2013-12-09 00:00
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2013-12-06 00:00
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- 電話：021-6533363955229872網(wǎng)址：http://www.westang.com大鼠透明質(zhì)酸（HA）ELISA試劑盒（用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi)）原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗大鼠HA單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的HA與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗大鼠HA，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍色，Z后加終止液硫酸，在450nm處測OD值，HA濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中HA濃度。試劑盒組成（2-8℃保存）酶標板（CoatedWells）96孔酶標抗體工作液（EnzymeConjugate）12ml10×標本稀釋液（SampleBuffer）12ml20×濃縮洗滌液（WashBuffer）50ml標準品（Standards）：2000ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗體工作液（BiotinylatedAntibody）12ml終止液（StopSolution）12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復凍融。2.標準品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成2000ng/ml的溶液。設標準管8管，每管加入標本稀釋液300ul。在**管中加入2000ng/ml的標準品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。4.洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）檢測程序1.加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板：同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應減除空白值后再行計算。2.以標準品1000、500、250、125、62.5、31、15.6、0ng/ml為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應HA含量。試劑盒性能1.靈敏度：Z小的HA檢測濃度小于9ng/ml。2.特異性：可同時檢測重組或天然的大鼠HA。不與大鼠其它細胞因子有交叉反應。3.重復性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10％。注意事項1.以上標準孔及待測樣品均建議做復孔，每次測定應同時做標準曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！[詳細]
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2018-09-13 10:00
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- 小鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)檢測試劑盒說明書該試劑盒以HRP標記的鏈霉親和素復合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）為基礎，可用于檢測血液,細胞、組織內(nèi)的特異性CD40抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的CD40一抗與相應靶抗原結(jié)合后，用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復合物，顯微鏡下觀察成像。小鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)檢測試劑盒所含試劑：試劑A通透液：0.1%Triton-X10010mL（選用）試劑B封閉緩沖液（封閉用）20mL試劑C（原裝進口分裝）已稀釋的即用型CD40一抗（2.5ml）試劑D（原裝進口分裝）生物素化羊抗兔IgG1支（濃度1.5mg/mL，稀釋比為1:300~1:500）50μL+抗體稀釋液20ml試劑EHRP-SA復合物1支（濃度1μM，稀釋比1:50~1:200）100μL試劑FDAB顯色液5ml用戶自備試劑：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羥基氨基甲烷1.21g氯化鈉7.6g加蒸餾水800mL，濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%體積比）2．抗原修復液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復液）10mMpH6.0檸檬酸緩沖液檸檬酸0.38g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水900mL，濃鹽酸調(diào)pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修復液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g加蒸餾水700mL用10mMNaOH調(diào)pH值至8.0，Z后定容至1000Ml緩沖甘油封固劑10mLTween205mL石蠟包埋組織切片免疫染色實驗步驟（建議方案）：石蠟包埋組織切片3~4μm厚度1.烤片：將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1hr；2.脫蠟：切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修復：根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復，常采用高壓、微波（溫度達到98~100℃）或酶消化修復法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗滌（2×2min）（具體修法見附1）*注：有些抗原勿需修復，直接進入第5步封閉。5.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育30min；6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2hr7.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；8.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30min；10.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；11.封閉：滴加試劑Tween20，37℃濕盒孵育封閉20min；12.加HRP-SA：滴加用試劑C稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20nM），37℃濕盒中孵育30min；13.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min），TBS洗滌（2×5min）；14.顯色：應用DAB溶液（試劑F）顯色；15.復染：自來水充分沖洗，復染，脫水，透明；16.封片：待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；17.觀察成像：顯微鏡下觀察成像。原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復合物，顯微鏡下觀察成像。小鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)檢測試劑盒注意事項：修復后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導致結(jié)晶或抗原封閉。緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復使用。若試劑為微量濃縮液，用前應低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。封片前一定要換用TBS充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween20，否則會影響結(jié)果觀察。如須復染細胞核，則在封片前復染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封片。附1：抗原修法常用抗原修復液：檸檬酸緩沖液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修復液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修復法酶消化修復切片脫蠟水化處理，TBS沖洗，在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。二、微波抗原修復法微波盒中加入抗原修復液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔或繼續(xù)微波10~15min，取出微波盒冷卻至室溫后，自來水沖洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異，須自行調(diào)整。三、直接高壓抗原修復法取修復液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置于耐高溫切片架上，修復液沸騰后放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣后計時1.5~2.5min即可脫離熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。四、隔水式高壓抗原修復法不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰，微波盒中加入修復液于微波爐中加熱至沸騰，將切片放入微波盒中，再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋，待噴氣后計時4~8min即可關(guān)閉熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復。[詳細]
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2018-10-09 10:00
產(chǎn)品樣冊
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