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采用示蹤激光誘導熒光方法進行噴霧燃燒診斷
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2012-01-23 00:00 345閱讀次數(shù)
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采用示蹤激光誘導熒光方法進行噴霧燃燒診斷
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- ZG**授權(quán)總代大量現(xiàn)貨電話QQ:4006551678Hydroxystilbamidine(FluoroGold)Catalog#:780000Selection:20mgPrice:2600ProductDescriptionHydroxystilbamidinehasbeenusedextensivelyasaretrogradetracerforneuronsandalsoahistochemicalstain.Pleasealsoseehydroxystilbamidine4%inH2O(80023),whichisamoreconvenient,ready-to-useform.λEx/λEm=361/536nmYellowsolidsolubleinwaterStoreat4°CandprotectfromlightC18H24N4O7S2MW:473FluoroGoldisatrademarkofFluorochrome,LLC.MSDS(PDF):MSDS80014相關(guān)應用資料:神經(jīng)示蹤劑應用背景:神經(jīng)示蹤劑常用于闡明神經(jīng)系統(tǒng)的解剖聯(lián)系。示蹤劑可以順行,從軸突到胞體;也可以逆行,從胞體到軸突。在這些示蹤劑的幫助下,可以確認軸突的起源細胞,他們支配某種特定結(jié)構(gòu)形成;也可以鑒別從某一特定的神經(jīng)元出來的軸突投射的目標位置。Fluoro-GoldTM熒光金(神經(jīng)逆行示蹤檢測)產(chǎn)品背景Fluoro-GoldTM是當今世界上應用Z普遍和非常有效的神經(jīng)逆行示蹤劑,F(xiàn)luorogold也稱為羥脒替(hydroxystilbamidine),是Fluorochrome,LLC.公司的專有產(chǎn)品,于1985年開始范圍內(nèi)銷售。Fluoro-GoldTMantibody(抗體)為Fluorochrome,LLC.特別開發(fā)的高靈敏度抗體,能夠大幅度增強Fluorogold的可見度。Fluorochrome,LLC.公司1998年S次引進該抗體以來,不僅大量文獻研究證實其有效性,而且成為行業(yè)檢測的金標準。產(chǎn)品優(yōu)勢1)Fluoro-Gold(熒光金)的產(chǎn)品優(yōu)勢:極其的神經(jīng)逆行熒光示蹤劑,靈敏度高且結(jié)果穩(wěn)定;不會非特異性結(jié)合傳代中未損傷的纖維;不會滲出逆行標記的神經(jīng)元;標記神經(jīng)元存活周期廣,1天或者高于1個月;可用壓力注射或者離子透入(iontophoresed)的方法將染料導入動物體內(nèi);與Z常用的其他幾種神經(jīng)解剖技術(shù)相兼容,比如免疫熒光術(shù)(IF),免疫細胞化學(ICC),放射自顯影技術(shù),過氧化物酶免疫組化(HRP-IHC),石蠟包埋和其他逆行熒光示蹤劑操作簡便安全,保質(zhì)期長;**可靠的材料來源;2)Fluoro-Gold(熒光金)與Fluoro-Gold抗體結(jié)合使用的優(yōu)勢:大幅度增強熒光金標記的可視度;允許更極ng確的解剖標測顯示相當細微的解剖結(jié)構(gòu)包含樹突,軸突和軸突末梢應用圖片:Left:VTA(40X)afterFluoro-Goldinjectionintheaccumbens.Antibodyisat1/100,000.Right:Hypothalamiccellsalongthe3rdleftventricle(40X)afterFlouro-GoldinjectioninthePVN.Antibodyisat1/50,000.產(chǎn)品使用1)Fluoro-Gold(熒光金)單獨標記技術(shù)溶解體系(vehicle):溶于蒸餾水,0.9%生理鹽水,或溶于0.2M中性磷酸鹽緩沖液配置成懸浮液染液濃度:有效染色濃度范圍1-10%。初次實驗推薦使用濃度4%。如果注射部位發(fā)生意外壞死,或者標記過于密集,可降低濃度至2%。Fluoro-Gold分子量為532.6daltons。注射方法:壓力注射;離子透入;或者晶體注入;術(shù)后存活時間:好的逆行神經(jīng)示蹤標記一般在術(shù)后2天~2個月內(nèi)觀察到。通常情況下術(shù)后的存活周期是3~5天。在染料不會向胞外擴散的前提下存活時間長能夠改善遠端神經(jīng)末梢的填充。固定:差不多同所有固定方式兼容,或者也可不做固定;常常使用含4%甲醛的中性生理緩沖鹽作為固定劑。注:含高濃度重金屬(如鋨,汞)的固定劑會導致熒光淬滅,另外含高濃度(>1%)戊二醛可能會加深背景熒光;組化處理:含F(xiàn)luoro-Gold的組織樣本幾乎與所有通用的組化處理技術(shù)兼容,經(jīng)常使用的是固定組織的冰凍切片(20m)。另還包含未固定組織的恒冷切片(10m);塑料(0.2-4m)或石蠟(3-10m)包埋的薄切片;聯(lián)合檢測:切片進一步處理用于第二種標志物(marker)的檢測如放射自顯影,HRP組化分析;免疫細胞化學;第二種熒光示蹤劑;熒光素復染等等。封片,清洗和蓋片:切片通常黏附在明膠包被的載玻片上,風干,二甲苯浸漬,然后加入非熒光的DPX塑性封片劑來蓋片;觀察與拍照:熒光金可直接用熒光顯微鏡觀察,使用寬帶紫外激發(fā)濾光片。顏色:中性pH緩沖液處理組織發(fā)射金色光;酸性pH緩沖液(如pH=3.3)處理組織發(fā)射藍色;也可以用數(shù)碼拍照或者膠片曝光來記錄結(jié)果。2)Fluoro-Gold(熒光金)+Fluoro-Goldantibody(熒光金抗體)的組合標記技術(shù)抗體特性:兔多克隆(100l,1:100dilutionl),BSAdiluent(50mMKPBS,0.4%Triton,1%BSA,1%NGS)稀釋500~1,000×,與Vectorelitekit結(jié)合使用大概可做300~1000張切片。抗體使用:熒光金注射入動物體內(nèi)之后,漂片(以灌注4%甲醛的大鼠腦組織切片,30m為例)在Fluoro-Gold抗體工作液中4度孵育18小時后,清洗,然后用生物素化GAR(BiotinylatedGoatAnti-RabbitIgGAntibody,1:1000,Cat#:BA-1000)室溫孵育1h,之后清洗。切片再用Avidin/Biotin(1:1000,vector,Cat#:PK6100)孵育1h,之后轉(zhuǎn)入DAB顯色底物孵育6mins(Diaminobenzidine(.04%)andNickelChloride(2.5%)in0.1MNaAcetatewith0.06%H2O2)。切片Z后進行清洗,組織黏合,干燥,脫水和蓋片。[詳細]
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