本文由 鶴壁市民生科技開發(fā)有限責(zé)任公司 整理匯編

2012-09-09 00:00 788閱讀次數(shù)

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　　　　　　　　細(xì)胞活性測定方法細(xì)胞活性測定方法有臺(tái)盼藍(lán)染色法、克?。洌┬纬煞?、3H放射性同位素?fù)饺敕?、MTT法等。其中MTT法以其快速簡便，不需要特殊檢測儀器、無放射性同位素、適合大批量檢測的特點(diǎn)而得到廣泛的應(yīng)用。但MTT法形成的Formazan為水不溶性的，需要加有機(jī)溶劑溶解，由于在去上清操作時(shí)會(huì)有可能帶走小部分的Formazan，故有時(shí)重復(fù)性略差。為了解決這個(gè)問題，研究人員又開發(fā)了很多種水溶性的四氮唑鹽類：如XTT、CCK-8（WST-8）等?，F(xiàn)就這三種四氮唑鹽類方法作一個(gè)簡單介紹：1.MTT法MTT：化學(xué)名：3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。缺點(diǎn)：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲產(chǎn)物不溶于水，需被溶解后才能檢測。這不僅使工作量增加，也會(huì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，而且溶解甲的有機(jī)溶劑對實(shí)驗(yàn)者也有損害。2.XTT法XTT：化學(xué)名：2,3-bis（2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl）-5-[（phenylamino）carbonyl]-2H-tetrazoliumhydroxide，作為線粒體脫氫酶的作用底物，被活細(xì)胞還原成水溶性的橙黃色甲產(chǎn)物。當(dāng)XTT與電子偶合劑（例如PMS）聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，其所產(chǎn)生的水溶性的甲產(chǎn)物的吸光度與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。優(yōu)點(diǎn)：1、使用方便，省去了洗滌細(xì)胞；2、檢測快速；3、靈敏度高，甚至可以測定較低細(xì)胞密度；4、重復(fù)性優(yōu)于MTT。缺點(diǎn)：XTT水溶液不穩(wěn)定，需要低溫保存或現(xiàn)配現(xiàn)用。3.CCK-8法或稱WST-8法CCK-8試劑中含有WST8：化學(xué)名：2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺酸苯）-2H-四唑單鈉鹽]，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法已被廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞增殖試驗(yàn)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及藥敏試驗(yàn)等。優(yōu)點(diǎn)：1、使用方便，省去了洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；2、檢測快速；3、靈敏度高，甚至可以測定較低細(xì)胞密度；4、重復(fù)性優(yōu)于MTT；5、對細(xì)胞毒性??；6、為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開即用。缺點(diǎn):1、與MTT相比，CCK-8和XTT的價(jià)格比較貴。2、CCK-8試劑的顏色為淡紅色，與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近，不注意的話容易產(chǎn)生漏加或多加。三種方法的比較MTT法XTT法CCK-8法（WST-8法）甲物水溶性難溶性水溶性水溶性檢測波長490nm450nm450nm性狀粉末2瓶溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用現(xiàn)配現(xiàn)用毋需預(yù)制使用有機(jī)溶劑DMSO或其它溶劑方便性++++++檢測速度++++++重復(fù)性+++++穩(wěn)定性+++++工作量------對細(xì)胞毒性------對人體毒性-----MTT原理、步驟、結(jié)果分析方法及注意事項(xiàng)MTT原理MTT全稱為3-（4,5）-dimethylthiahiazo（-z-y1）-3,5-di-phenytetrazoliumromide，漢語化學(xué)名為3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的染料。MTT比色法，是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。　　缺點(diǎn)：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲產(chǎn)物不溶于水，需被溶解后才能檢測。這不僅使工作量增加，也會(huì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，而且溶解甲的有機(jī)溶劑對實(shí)驗(yàn)者也有損害。MTT溶液的配制方法通常，此法中的MTT濃度為5mg/ml。因此，可以稱取MTT0.5克，溶于100ml的磷酸緩沖液（PBS）或無酚紅的培養(yǎng)基中，用0.22μm濾膜過濾以除去溶液里的細(xì)菌，放4℃避光保存即可。在配制和保存的過程中，容器**用鋁箔紙包住。實(shí)驗(yàn)的時(shí)候我一般關(guān)閉超凈臺(tái)上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。需要注意的是，MTT法只能用來檢測細(xì)胞相對數(shù)和相對活力，但不能測定細(xì)胞數(shù)。在用酶標(biāo)儀檢測結(jié)果的時(shí)候，為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的線性，MTT吸光度**在0-0.7范圍內(nèi)。MTT一般**現(xiàn)用現(xiàn)配，過濾后4℃避光保存兩周內(nèi)有效，或配制成5mg/ml保存在-20度長期保存，避免反復(fù)凍融，**小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分裝在EP管里，用的時(shí)候現(xiàn)配，直接往培養(yǎng)板中加，沒必要一下子配那么多，尤其當(dāng)MTT變?yōu)榛揖G色時(shí)就不能再用了。MTT有致癌性，用的時(shí)候小心，有條件**帶那種透明的簿膜手套。配成的MTT需要無菌，MTT對菌很敏感；往96孔板加時(shí)不避光也沒有關(guān)系，畢竟時(shí)間較短，或者你不放心的時(shí)候可以把操作臺(tái)上的照明燈關(guān)掉。配制MTT時(shí)用PBS（ph=7.4）溶解。PBS配方：NaCl8g＋KCl0.2g＋Na2HPO41.44g＋KH2PO40.24g調(diào)pH7.4，定容1L。普通MTT法實(shí)驗(yàn)步驟：1：接種細(xì)胞：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔1000-10000個(gè)細(xì)胞接種到96孔板，每孔體積200ul。2：培養(yǎng)細(xì)胞：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3-5天（可根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時(shí)間）。3：呈色：培養(yǎng)3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4）20ul。繼續(xù)孵育4h，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮細(xì)胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ulDMSO，振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。4：比色：選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長曲線。藥物MTT法實(shí)驗(yàn)步驟貼壁細(xì)胞：1：收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入100ul，鋪板使待測細(xì)胞調(diào)密度1000-10000孔，（邊緣孔用無菌PBS填充）。2：5%CO2，37℃孵育，至細(xì)胞單層鋪滿孔底（96孔平底板），加入濃度梯度的藥物，原則上，細(xì)胞貼壁后即可加藥，或兩小時(shí)，或半天時(shí)間，但我們常在前一天下午鋪板，次日上午加藥。一般5-7個(gè)梯度，每孔100ul，設(shè)3-5個(gè)復(fù)孔。建議設(shè)5個(gè)，否則難以反應(yīng)真實(shí)情況3：5%CO2，37℃孵育16-48小時(shí)，倒置顯微鏡下觀察。4：每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），繼續(xù)培養(yǎng)4h。若藥物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖2-3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。5：終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。6：每孔加入150ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值。7：同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜），對照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜）。懸浮細(xì)胞：1：收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞懸液濃度1×106/ml，按次序?qū)ⅱ傺a(bǔ)足的1640（無血清）培養(yǎng)基40ul；②加ActinomycinD（有毒性）10ul用培養(yǎng)液稀釋（儲(chǔ)存液100mg/ml，需預(yù)試尋找**稀釋度，1:10-1:20）；③需檢測物10ul；④細(xì)胞懸液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（邊緣孔用無菌水填充）。每板設(shè)對照（加100ml1640）2：置37℃，5%CO2孵育16-48小時(shí)，倒置顯微鏡下觀察。3：每孔加入10ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），繼續(xù)培養(yǎng)4h。（懸浮細(xì)胞推薦使用WST-1，培養(yǎng)4h后可跳過步驟4），直接酶聯(lián)免疫檢測儀OD570nm（630nm校準(zhǔn)）測量各孔的吸光值）4、離心（1000轉(zhuǎn)x10min），小心吸掉上清，每孔加入100ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD570nm（630nm校準(zhǔn)）測量各孔的吸光值。5、同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜），對照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜），每組設(shè)定3復(fù)孔。注意事項(xiàng)：（1）選擇適當(dāng)?shù)眉?xì)胞接種濃度。（2）避免血清干擾：一般選小于10％的胎牛血清的培養(yǎng)液進(jìn)行試驗(yàn)。在呈色后盡量吸盡孔內(nèi)殘余培養(yǎng)液。（3）設(shè)空白對照：與試驗(yàn)平行不加細(xì)胞只加培養(yǎng)液的空白對照。其他試驗(yàn)步驟保持一致，Z后比色以空白調(diào)零。（4）MTT實(shí)驗(yàn)吸光度Z后要在0-0.7之間，超出這個(gè)范圍就不是直線關(guān)系。（5）用96孔板培養(yǎng)細(xì)胞做MTT測細(xì)胞活力,應(yīng)該加多少1640培養(yǎng)基,多少M(fèi)TT和DMSO合適根據(jù)書上說的加200ul1640,20ulMTT,150ulDMSO加DMSO之前要盡量去掉培養(yǎng)液，便于DMSO溶解甲顆粒進(jìn)行比色測定。（6）一般每孔4000個(gè)細(xì)胞為宜，既細(xì)胞濃度在20000個(gè)/ml，MTT加20ul，作用四小時(shí)后洗掉上清液，注意不要將甲洗掉，然后每孔加150ulDMSO，在脫色搖床上振蕩10分鐘，然后測吸光值。[詳細(xì)]

  2024-09-14 22:35

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• pH測定方法

  pH測定方法[詳細(xì)]

  2024-09-30 06:01

  應(yīng)用文章

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• 殘?zhí)繙y定方法之一：康氏殘?zhí)繙y定方法

  本方法用手測定石油產(chǎn)品經(jīng)蒸發(fā)和熱解后留下的殘?zhí)苛?，以提供石油產(chǎn)品相對生焦傾向的指標(biāo)。本方法一般用于在常壓蒸餾時(shí)易部分分解、相對地不易揮發(fā)的石油產(chǎn)品。對含有能生灰組分的石油產(chǎn)品（用GB508《石油產(chǎn)品灰分測定法》測定）則會(huì)得到殘?zhí)恐灯叩慕Y(jié)果，誤差的大小取決于所生成灰分的量。注:①本方法中所用的“殘?zhí)俊币辉~，是指石油產(chǎn)品經(jīng)蒸發(fā)和熱解后所形成的碳質(zhì)殘余物。它不全部是碳。而是一種會(huì)進(jìn)一步熱解變化的焦炭。本方法采用“殘?zhí)俊边@個(gè)詞，只是順從習(xí)慣的稱法。②本法廣泛應(yīng)用于多種石油產(chǎn)品。本方法和ZBE30001《石油產(chǎn)品殘?zhí)總?cè)定法一（蘭氏法）》這兩種方法所測得的殘?zhí)恐?，不但在?shù)俏上不相同，而且它們之間也找不到滿意的相互關(guān)系。對于一些不容易裝人蘭氏焦化球的重質(zhì)殘?jiān)剂嫌?、焦化原料等油?宜用本方法測定殘?zhí)?。燃燒器燃料的殘?zhí)恐?，可用來粗略地估?jì)燃料在蒸發(fā)式的釜型和套管型燃燒器中形成沉積物的傾向。同樣，不含硝酸戊酯（或如果含有硝酸戊酯，則只要事先測定未加此添加劑基礎(chǔ)燃料）的柴油，殘?zhí)恐荡篌w上與燃燒室的沉積物有對應(yīng)關(guān)系。測定粗柴油的殘?zhí)恐?，對指?dǎo)粗柴油造氣的生產(chǎn)是有用的，而原油殘?jiān)?、汽缸油料和重質(zhì)潤滑油料的殘?zhí)恐?，對指?dǎo)潤滑油生產(chǎn)也是有用的。下述情況應(yīng)予注意:a.發(fā)動(dòng)機(jī)油：發(fā)動(dòng)機(jī)油的殘?zhí)恐担欢缺徽J(rèn)為能表示發(fā)動(dòng)機(jī)油在發(fā)動(dòng)機(jī)的燃燒室中生成碳質(zhì)沉積物量的指標(biāo)，但由于許多石油產(chǎn)品中都存在添加劑，所以現(xiàn)在看來這一點(diǎn)是值得懷疑的。例如，有灰分生成的清凈添加劑，會(huì)增加石油產(chǎn)品的殘?zhí)恐?，但它通常可以減少石油產(chǎn)品生成沉積物的傾向。b.柴油:含有硝酸戊酯的柴油的殘?zhí)恐灯?。但是，如果對不含硝酸戊酯的柴油，或?qū)?zhǔn)備要調(diào)人硝酸戊脂的基礎(chǔ)燃料進(jìn)行試驗(yàn)，則其殘?zhí)恐蹬c燃燒室沉積物有近似的關(guān)系。c.含有有灰分生成的添加劑的石油產(chǎn)品:殘?zhí)恐悼赡芘c形成沉積物的傾向無關(guān)，而日可能比形成沉積物的相應(yīng)傾向要高些。本方法參照采用國際標(biāo)準(zhǔn)ISO6615-1983《右油產(chǎn)品殘?zhí)繙y定法（康氏法）》。方法概要把已稱重的試樣置于坩堝內(nèi)進(jìn)行分解蒸餾。殘余物經(jīng)強(qiáng)烈加熱一定時(shí)間即進(jìn)行裂化和焦化反應(yīng)。在規(guī)定的加熱時(shí)間結(jié)束后，將盛有碳質(zhì)殘余物的坩堝置于干燥器內(nèi)冷卻并稱重，計(jì)算殘?zhí)恐担ㄒ栽嚇拥馁|(zhì)量百分?jǐn)?shù)表示）。相關(guān)檢測儀器：YT-268康氏殘?zhí)繙y定儀康氏殘?zhí)繙y定儀[詳細(xì)]

  2018-08-20 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 方法介紹：針葉光合作用測定方法

  方法介紹：針葉光合作用測定方法[詳細(xì)]

  2014-05-28 00:00

  其它

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• 石油產(chǎn)品瀝青延度測定方法

  石油產(chǎn)品瀝青延度測定方法[詳細(xì)]

  2014-12-02 00:00

  安裝說明

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• 微量水分測定儀測定方法

  微量水分測定儀國標(biāo)及測試方法[詳細(xì)]

  2018-08-19 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 石油產(chǎn)品色度測定方法

  1.主題內(nèi)容與適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測定石油產(chǎn)品顏色的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種潤滑油、煤油及柴油等石油產(chǎn)品。2.引用標(biāo)準(zhǔn)GB/T6540石油產(chǎn)品顏色測定法3.方法概要將試樣注人比色管內(nèi)，然后與標(biāo)準(zhǔn)玻璃色片相比較，以其相當(dāng)?shù)纳?hào)作為該試樣的色度。4.儀器與材料4.1儀器4.1.1比色儀:由光源、標(biāo)準(zhǔn)色盤、梭鏡和觀察目鏡等組成，并附有比色管。比色儀在出廠時(shí)應(yīng)經(jīng)過調(diào)整，使視野的兩半部光度一致。4.1.2比色管:內(nèi)徑為32.5-33.4mm.高為120-130mm,由無色透明玻璃制成的平底圓筒4.2材料4.2.1煤油:稀釋深色油品用。顏色水白，并不得大于本標(biāo)準(zhǔn)1號(hào)色度。4.2.2擦鏡紙。5.準(zhǔn)備工作5.1用擦鏡紙將比色管仔細(xì)擦凈。5.2向一只比色管內(nèi)注人蒸餾水至50mm以下的深度，放人帶蓋容器室的右邊作為參比液。5.3向另一只比色管內(nèi)注人透明的試樣至50mm以上的深度，放人帶蓋容器室的左邊，蓋上蓋子。若試樣渾濁不透明時(shí)，則需加熱至渾濁消失后注人比色管內(nèi)，立即測定。5.4如試樣的顏色深于25號(hào)標(biāo)準(zhǔn)玻璃色片時(shí)，則用煤油稀釋后測定混合物的顏色。稀釋的比例是試樣與煤油的體積比為15:85.相關(guān)產(chǎn)品鏈接：石油產(chǎn)品色度測定儀YT-0168石油產(chǎn)品色度測定儀[詳細(xì)]

  2018-08-20 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 蛋白質(zhì)溶液濃度測定方法

  蛋白質(zhì)溶液濃度測定方法蛋白質(zhì)溶液濃度測定方法有多種，下述幾種方法可供選用。蛋白質(zhì)濃度的測定，往往用于計(jì)算純化方法的回收率的重要方法。一、雙縮脲法雙縮脲法是**個(gè)用比色法測定蛋白質(zhì)濃度的方法，至令仍廣泛采用。在需要快速，但不很準(zhǔn)確的測定中，常用此法。硫銨不干擾顯色，這對蛋白質(zhì)提純的早期價(jià)段是非常有利的。雙縮脲法的原理是Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵，以及酪氨酸殘基絡(luò)合，形成紫藍(lán)色絡(luò)合物，此物在540nm波長處有Zda吸收。雙縮脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白質(zhì)溶液測定。干擾物有硫醇，以及具有肽性質(zhì)緩沖液，如Tris、Good緩沖液等?？捎贸恋矸ǔジ蓴_物，即用等體積10%冷的三氯醋酸沉淀蛋白質(zhì)，然后棄去上清液，再用已知體積的1mNaOH溶解沉淀的蛋白質(zhì)進(jìn)行定量測定。二、Lowry法此法是雙縮脲法的進(jìn)一步發(fā)展。他的**步就是雙縮脲反應(yīng)，即Cu++與蛋白質(zhì)在堿性溶液中形成絡(luò)合物，然后這個(gè)絡(luò)合物還原磷鉬磷-磷鎢酸試劑（福林-酚試劑），結(jié)果得到深藍(lán)色物。此法比雙縮脲法靈敏得多，適合于測定20mg/L～400mg/L含量的蛋白質(zhì)溶液。其干擾物質(zhì)與雙縮脲法相同，而且受他們的影響更大，硫醇和許多其他物質(zhì)的存在會(huì)使結(jié)果嚴(yán)重偏差。另外要注意的是，加入福林試劑時(shí)要特別小心，試劑只在酸性pH環(huán)境中才穩(wěn)定，上述提到的還原反應(yīng)只有在pH10時(shí)才發(fā)生，因此，福林試劑加入到堿性的Cu2+-蛋白質(zhì)溶液中時(shí)，必須立刻攪拌，以使磷鉬酸-磷鎢酸試劑在未被破壞之前能有效地被Cu2+-蛋白質(zhì)絡(luò)合物所還原。三、紫外吸收法大多數(shù)蛋白質(zhì)在280nm波長處有特征的Zda吸收，這是由于蛋白質(zhì)中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在的緣故，因此，利用這個(gè)特異性吸收，可以計(jì)算蛋白質(zhì)的含量。如果沒有干擾物質(zhì)的存在，在280nm處的吸收可用于測定0.1～0.5mg/ml含量的蛋白質(zhì)溶液。部分純化的蛋白質(zhì)常含有核酸，核酸在260nm波長處有Zda吸收。有核酸時(shí)，所測得的蛋白質(zhì)濃度必須作適當(dāng)校正，一般按下述公式粗略計(jì)算：是蛋白質(zhì)溶液在280nm波長處（光程1厘米）測得的光密度值。是蛋白質(zhì)溶液在260nm小波長處（光程1厘米）處所測得的光密度值。此方程是從烯醇酶（在酵母核酸存在時(shí)）得出來的。因此，對其他蛋白質(zhì)和其他核酸不一定適用。由于各種蛋白質(zhì)所含芳香族氨基酸的量不同，因此，濃度為0.1%的各種蛋白質(zhì)在280nm處的消光系數(shù)（）在0.5～2.5之間變化。所有的蛋白質(zhì)在230nm以下都有強(qiáng)吸收。例如，牛血清白蛋白的α0.1%在225nm和215nm處分別為5.0和11.7，而在280nm處測為0.58。在230nm以下的強(qiáng)吸收是由于肽鍵的存在，因此，此值對所有的蛋白質(zhì)都是一樣的。從215nm和225nm處的光密度之差可用于測定濃度為10μl/ml～100μl/ml的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)濃度可以近似地由下式得到：光密度之差求得，這一公式是減去溶液中非蛋白質(zhì)成分產(chǎn)生的誤差。但是，蛋白質(zhì)之間的分子量差異比較大，因此，在比較幾種蛋白質(zhì)含量時(shí)，必須作適當(dāng)?shù)男Ｕ?。由于蛋白質(zhì)的吸收峰常因pH改變而變化，所以在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，必須與樣品條件一致。相關(guān)產(chǎn)品如下：聯(lián)系方式上海索萊寶生物科技有限公司電話：021-6485566518018609966傳真：021-54261506郵編：200233地址：上海市欽江路15號(hào)14層郵箱：solarbio@126.com網(wǎng)址：www.shsolarbio.com優(yōu)質(zhì)試劑質(zhì)量放心價(jià)格Zdi為ZG生物產(chǎn)業(yè)做貢獻(xiàn)蛋白濃度測定相關(guān)產(chǎn)品特價(jià)促銷索寶特價(jià)另有其他常用生化試劑歡迎詢問【021-54100800】[詳細(xì)]

  2018-09-02 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 飼料粗脂肪測定方法

  本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動(dòng)物飼料脂肪含量的測定方法，本方法適用于油籽和油籽殘?jiān)酝獾膭?dòng)物飼料，為了本方法的測定效果，將動(dòng)物飼料分為下列兩類；B類產(chǎn)品的樣品提取前需要水解。B類：純動(dòng)物性飼料，包括乳制品；脂肪不經(jīng)預(yù)先水解不能提取的純植物性飼料，如谷蛋白、酵母、大豆及馬鈴薯以及加熱處理的飼料。含有一定數(shù)量加工產(chǎn)品的配合飼料，其脂肪含量至少有20%來自這些加工產(chǎn)品。A類：B類以外的動(dòng)物飼料對于油籽，在ISO659[1]中介紹了一種已烷提取的“油含量”測定方法。[詳細(xì)]

  2018-09-12 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• COD國標(biāo)測定方法

  重鉻酸鉀法測定COd方法的適用范圍：用0.25mol/L的重鉻酸鉀溶液可測定大于50mg/L的Cod值，未經(jīng)稀釋的水樣的測定上限是700mg/L。用0.025mol/L的重鉻酸鉀溶液可測定5-50mg/L的Cod值。[詳細(xì)]

  2018-10-18 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 阿維菌素液相色譜測定方法

  阿維菌素液相色譜測定方法[詳細(xì)]

  2018-11-13 15:46

  產(chǎn)品樣冊

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• 水質(zhì)測定方法—國家標(biāo)準(zhǔn)

  [詳細(xì)]

  2020-04-26 17:54

  標(biāo)準(zhǔn)

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• 六價(jià)鉻測定方法（EPA3060A）

  六價(jià)鉻測定方法（EPA3060A）[詳細(xì)]

  2024-09-28 00:12

  報(bào)價(jià)單

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