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產(chǎn)品介紹 - 移液管助吸器 - Pi-pump, 大型
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2024-09-20 03:40 508閱讀次數(shù)
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- *適用于0.1-100ml體積范圍的刻度移液管和固定移液管*新的閥門控制功能更極ng確控制半月形液面,使分液更極ng確*吸液速度快:25ml/5秒*單指掌控吸液和排液過程*一次充電Z多可工作7小時,充電時也可使用*移液適配器和錐形部件可高壓滅菌*壓力平衡系統(tǒng)可以防止吸入的蒸汽進(jìn)入吸液器而引起的腐蝕[詳細(xì)]
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2018-09-28 10:00
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2018-10-07 10:00
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2014-08-18 00:00
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移液管相關(guān)
- 基因組DNA相關(guān)基因組DNA提取試劑盒簡介:DNA是遺傳信息的載體,是Z重要的生物信息分子,是分子生物學(xué)研究的主要對象,為了進(jìn)行測序、雜交、基因表達(dá)、文庫構(gòu)建等試驗,獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前提,因此基因組DNA的提取也是分子生物學(xué)試驗技術(shù)中Z重要、Z基本的操作之一。Solarbio公司提供各種不同樣品基因組DNA提取試劑盒,如植物、動物、細(xì)菌、細(xì)胞、血液、酵母等基因組DNA提取試劑盒。所提取的基因組純度高,片段大小在50kb左右。用戶可根據(jù)需要選用不同的試劑盒來進(jìn)行不同樣品的抽提?;蚪MDNA提取的原則:1、保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性(因為遺傳信息全部儲存在核酸一級結(jié)構(gòu)中,故完整的一級結(jié)構(gòu)是保證核酸結(jié)構(gòu)與功能研究的基礎(chǔ))。2、排除其它分子(如蛋白質(zhì)、多糖、脂類、有機(jī)溶劑等)的污染,使下游試驗順利進(jìn)行。基因組DNA提取的原理和方法:DNA與組蛋白構(gòu)成核小體,核小體纏繞成中空的螺旋管狀結(jié)構(gòu),即染色絲,染色絲再與許多非組蛋白形成染色體。染色體存在于細(xì)胞核中,外有核膜及胞膜。從組織中提取DNA必須先將組織分散成單個細(xì)胞,然后破碎胞膜及核膜,使染色體釋放出來,同時去除與DNA結(jié)合的組蛋白及非組蛋白。1、樣品預(yù)處理從各種不同來源的樣品(如細(xì)菌、酵母、血液、動植物組織細(xì)胞等)中提取高純度的基因組DNA,因細(xì)胞結(jié)構(gòu)及其成分不同,樣品預(yù)處理方式也不同,以下簡單介紹常用提取材料的預(yù)處理方式,若需詳細(xì)了解,請參考本公司各基因組DNA提取試劑盒說明書。部分樣品預(yù)處理方式:植物材料液氮研磨動物材料勻漿、液氮研磨培養(yǎng)細(xì)胞蛋白酶K處理細(xì)菌溶菌酶破壁酵母破壁酶破壁、玻璃珠研磨血液紅細(xì)胞裂解液去紅細(xì)胞2、細(xì)胞裂解CTAB法:適用于植物組織、真菌等。CTAB是一種陽離子去污劑,可溶解細(xì)胞膜,并與核酸形成復(fù)合物。該復(fù)合物在高鹽溶液中(>0.7MNaCl)是可溶的,通過有機(jī)溶劑抽提,去除蛋白、多糖、多酚等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。SDS法:適用于細(xì)菌、血液、酵母、動物組織、細(xì)胞等。SDS是一種陰離子去污劑,可溶解細(xì)胞膜,裂解細(xì)胞,使蛋白質(zhì)變性、染色體解體。其它裂解方法:物理方式:機(jī)械剪切、超聲波破碎、研磨勻漿等化學(xué)方式:異硫氰酸胍、堿裂解等酶法:蛋白酶K3、DNA分離純化純化要求:核酸樣品中不應(yīng)存在對酶(如核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶等)有YZ作用的成分。其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖、多酚和脂類分子等污染應(yīng)降低到Zdi程度。排除其它核酸分子的污染,如提DNA時應(yīng)去除RNA,反之亦然。純化方法:細(xì)胞破碎后,常使用吸附材料結(jié)合方法去除雜質(zhì)和純化DNA,主要有硅基質(zhì)材料、陰離子交換樹脂和磁珠等。因硅基質(zhì)材料可特異吸附核酸DNA,使用方便、快捷,不需要使用有毒溶劑如酚、氯仿等,使得提取基因組像過濾一樣簡單,因此硅基質(zhì)材料成為大規(guī)模分離純化DNA的通用方法。硅基質(zhì)材料吸附核酸的原理:主要利用DNA在高鹽低pH值環(huán)境下與硅基質(zhì)材料相結(jié)合,在低鹽高pH值環(huán)境下與硅基質(zhì)材料脫離的特征。其機(jī)理可能是高濃度鹽離子破壞了硅基質(zhì)水分子結(jié)構(gòu),形成陽離子橋,當(dāng)鹽被清除后,再水化的硅石破壞了基質(zhì)和DNA之間的吸引力,因而DNA從硅基質(zhì)上被洗脫下來。注意事項:盡量簡化操作步驟,縮短提取過程,以減少各種有害因素對核酸的破壞。減少化學(xué)物質(zhì)對DNA的降解,為避免過酸、過堿對DNA雙鏈中磷酸二酯鍵的破壞,操作多在pH值4.0-10.0的條件下進(jìn)行。防止基因組DNA的生物降解,主要是DNase降解基因組DNA,DNase需二價金屬陽離子如Mg2+等的激活,可用EDTA等金屬離子螯合劑螯合Mg2+以YZDNase的活性。減少物理因素對DNA的降解,物理降解因素主要包括機(jī)械剪切力(如劇烈振蕩、攪拌等),細(xì)胞突然置于低滲液中導(dǎo)致的細(xì)胞爆炸式破裂,DNase大量釋放,樣品反復(fù)凍融和高溫等。4、DNA洗脫收集DNA的洗脫效率取決于以下重要因素:洗脫液成分:采用硅基質(zhì)膜吸附的DNA,可將DNA在低鹽高pH值條件下洗脫下來。pH值在7.0-8.5之間洗脫效率較高,pH值低于7.0則洗脫效率很低。一般基因組提取試劑盒中的洗脫緩沖液就是TE(pH8.0),既為DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫下來提供良好的pH環(huán)境,其中的EDTA又能保證DNA不被DNase降解,同時由于EDTA濃度非常低,對核酸內(nèi)切酶、DNA聚合酶的影響非常微弱,不影響后續(xù)實驗,可放心使用。洗脫液體積:當(dāng)洗脫液體積小于30ul時,洗脫效率很低且不穩(wěn)定;當(dāng)洗脫液體積在50-200ul時,洗脫效率穩(wěn)定在80-90,并可保證得到Zda產(chǎn)量,因此洗脫液體積不能小于30ul。加洗脫液部位:100-200ul洗脫液能完全覆蓋硅基質(zhì)膜,DNA的洗脫量可得到保證,但當(dāng)洗脫液體積較少如30-50ul時,須在硅基質(zhì)膜中間部分懸空滴加洗脫液,以確保少量的洗脫液能完全覆蓋硅膠膜。洗脫液的溫度:在加洗脫液之前,先將洗脫液在60-75℃水浴中預(yù)熱10分鐘,可有效提高DNA的洗脫效率。洗脫時間和次數(shù):加入預(yù)熱的洗脫液后,可在室溫放置2-5分鐘使DNA完全溶解在洗脫液里通過離心而洗脫下來。同時可進(jìn)行二次或三次洗脫,即將前次洗脫下來的洗脫液再上柱、離心,使前次沒有洗脫下來的DNA再次溶解在洗脫液里,從而提高DNA的產(chǎn)量。5、DNA的定量及檢測提取得到的DNA*片段需從分子質(zhì)量、濃度、純度等方面進(jìn)行檢測,從而判斷DNA質(zhì)量。用瓊脂糖凝膠電泳分析DNA分子質(zhì)量:得到的基因組DNA*片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。Solarbio公司的基因組DNA提取試劑盒提取的不同材料基因組DNA*片段大小一般在50kb左右,能很好地滿足后續(xù)試驗的要求。通常用瓊脂糖凝膠電泳分析DNA分子質(zhì)量時,以溴酚藍(lán)為示蹤染料,EB染色,紫外觀察,并與DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)對照即可判斷所提DNA的平均分子量。高質(zhì)量的基因組DNA應(yīng)顯示為單一條帶,如DNA降解則表現(xiàn)為彌散條帶。用紫外分光光度計檢測DNA濃度和純度:濃度測定:DNA在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當(dāng)于大約50ug/ml雙鏈DNA。以下簡單介紹OD260的測定方法:所提基因組DNA樣品=100ul進(jìn)行OD260值測定的待測樣品=20ul所提基因組DNA樣品+180ulTE=200ulDNA稀釋倍數(shù)=200ul/20ul=10倍如200ul待測樣品OD260值=0.2待測樣品濃度(即100ul基因組DNA樣品濃度)=50ug/ml×OD260值×稀釋倍數(shù)=100ug/ml所提100ul基因組DNA樣品總量=100ug/ml×100ul=10ugDNA純度測定:一般用OD260/OD280值檢測DNA樣品的純度。正常OD260/OD280值約為1.7-1.9,說明DNA純度較好;若OD260/OD280值小于1.7,說明可能有蛋白污染;若OD260/OD280值大于2.0,說明可能有RNA污染或DNA已經(jīng)降解。注:因為pH值和離子會影響光吸收值,因此洗脫時如不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,OD260/OD280值會偏低,但并不表示純度低。6、DNA的儲存儲存溶液:DNA為兩性解離分子,在堿性條件下較穩(wěn)定,因此一般用TE(pH8.0)保存。TE的成分為:10mMTris-HCl(Tris與鹽酸形成強(qiáng)的緩沖對);1mMEDTA(乙二胺四乙酸,能螯合二價金屬陽離子,YZDNase的活性);pH8.0(堿性條件可減少DNA的脫氨作用,防止降解)。ddH2O的正常pH值為7.0,可作為DNA的儲存液,但有些實驗室制備的ddH2O呈酸性(pH值小于7.0),這不僅影響DNA的洗脫效率,而且導(dǎo)致長時間保存的DNA容易發(fā)生降解。因此建議用TE作為DNA的長期儲存液。儲存條件:為避免DNA降解,提取的DNA應(yīng)先進(jìn)行分裝,然后置于-20℃或-70℃保存,同時注意避免反復(fù)凍融造成DNA降解。[詳細(xì)]
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2012-07-18 00:00
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