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關于做ELISA試劑盒過程中

本文由 研域生物技術(上海)有限公司 整理匯編

2018-11-05 10:00 203閱讀次數(shù)

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關于做ELISA試劑盒過程中,難免會遇到各種不同的問題,比如標準曲線不好,試劑盒的回收率,假陰性,假陽性,實驗的重復性不好等等?,F(xiàn)在我司就來一一解答用戶們在實驗過程中遇到的各種疑問!ELISA試劑盒曲線問題:1,與曲線好壞相關,,保證曲線的正常2,衍生化試劑原因(長時間衍生化試劑變質(zhì)),更換衍生化試劑3.OD值不正常試劑盒未回溫,試劑盒回溫到25℃溫度控制不好,控制正確溫度孵育時間不準確,控制孵育時間洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加,洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干陽光直射,對著風直接吹,避風避酶標儀的波長錯誤,酶標儀的波長450nm抗體的稀釋錯誤,正確的稀釋抗體水質(zhì)問題,用娃哈哈礦泉水代替4.白板洗滌液配制錯誤,正確的配制洗滌液少加液體(錯加液體),正確的步驟加液體5,儀器試劑原因離心管未清洗干凈,正確的洗滌器具有機溶劑的影響,做試劑空白看影響結(jié)果6.無梯度標準品也污染,換標準品點板OD值不正常,控制溫度時間在做一次人為點板,不要點板7.線性不好OD值不正常,控制溫度時間在做一次ELISA試劑盒回收率8.空白管陽性高樣本本身就是陽性樣本,換陰性樣本做回收率空白管在實驗中被污染,實驗中防止交叉污染水質(zhì)原因用,娃哈哈礦泉水代替9.偏高添加量不準確,極ng準的添加量添加濃度不適合,添加合適的濃度取液吹干量多,準確的取液吹干取到其它相層液體,取需用相吹干復溶液未稀釋或加入量少,正確的稀釋復溶液10.偏低添加量不準確,極ng準的添加量添加濃度不適合,添加合適的濃度取液吹干量少,準確的取液吹干復溶液稀釋錯誤或加入量多,正確的稀釋復溶液假陰、陽性11,水質(zhì)原因:點復溶液驗證,用娃哈哈礦泉水代替12,實驗操作原因吸取到其它相吹干,準確的取液吹干離心不徹底,延長離心時間樣本的污染,更換樣本乳化未處理完全,溫?。?0℃)處理乳化現(xiàn)象

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