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  什么情況062 2011-04-12 00:00:00

  色譜柱在HPLC中是非常關(guān)鍵的部件。一臺(tái)色譜儀如果沒有色譜柱幾乎什么工作也做不了。色譜柱是消耗品，有一定壽命，使用中也非常容易出問題。普通的正相反相色譜柱使用得當(dāng)可用一、兩年。使用不得當(dāng)用兩、三個(gè)月就可能損壞。所以使用中應(yīng)該非常注意。 1. 在使用一根新的色譜柱之前，一定要看柱說明書，將柱子的使用壓力、pH值、溫度范圍和所用流動(dòng)相種類都要弄清楚。接觸Z多的是C18色譜柱，它對(duì)試劑應(yīng)用的范圍非常廣，甲醇、水、乙腈、四氫呋喃、、正乙烷、各種緩沖鹽都適用。但其他的色譜柱所使用的試劑就有一定的要求，有的色譜柱只能使用水，不能使用有機(jī)試劑，有的色譜柱只能使用有機(jī)試劑，而且使用指定是某一種，象GPC色譜柱。這些事情一定搞清楚，如果流動(dòng)相使用不對(duì)，柱子很快會(huì)損壞。另外在更換柱子時(shí)不能讓不能使用的流動(dòng)相進(jìn)入柱子。 2. 柱子是有方向的，柱子上箭頭的方向就是流動(dòng)相流動(dòng)的方向。當(dāng)換新柱子時(shí)，不要馬上就接到檢測器上使用。將柱子入口處接在進(jìn)樣器的出口，柱子出口處（即箭頭的一端）先不接檢測器，按箭頭方向垂直朝上，用流動(dòng)相（甲醇）以1ml/min的流速?zèng)_洗1min左右。將柱子里的小氣泡全部趕走以后再接到檢測器上，否則小氣泡跑到檢測池里，就很難趕走，檢測器產(chǎn)生噪聲信號(hào)，基線也就走不好。 3. 關(guān)于壓力對(duì)色譜柱的影響：常用的正反兩相色譜柱一般耐壓在12～20MPa之間，生產(chǎn)廠家不同，耐壓也不同，從理論上講耐壓高的色譜柱柱效就高，但柱效高低不僅與耐壓的高低有關(guān)，還有其他因素。從使用中看，在保證柱效的同時(shí)，耐壓不要太高，儀器所顯示的壓力是流路、混合器、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱壓、流通池總體的壓力，檢查柱壓力應(yīng)分段檢查。壓力過高不僅柱子受不了，其他的部件也會(huì)出問題，例如自動(dòng)進(jìn)樣器。 4. 色譜柱對(duì)pH值是有一定的使用范圍。以硅膠為擔(dān)體的柱子一般使用范圍在2～7pH。 耐堿性能不太好，流動(dòng)相的pH大于8會(huì)使硅膠溶解。有些分析條件須用堿性流動(dòng)相，這時(shí)一定要選耐堿性好的色譜柱，流動(dòng)相的PH值過高或過低，流動(dòng)相使用純水，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對(duì)試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學(xué)破壞，這種對(duì)色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復(fù)的。 5. 色譜柱的使用溫度不要超過說明書上規(guī)定的溫度。一般使用溫度在60℃以下，典型硅膠基質(zhì)色譜柱的使用溫度在5℃與60℃之間，高溫使用會(huì)縮短柱壽命。 6. 色譜柱使用過程中壓力的驟然波動(dòng)，溫度的驟然變化或機(jī)械撞擊都會(huì)對(duì)色譜柱床產(chǎn)生影響。進(jìn)樣過程中，進(jìn)樣閥轉(zhuǎn)動(dòng)太慢引起壓力波動(dòng)；流速的突然增大都應(yīng)在日常分析中盡量避免。一般說來，在低柱壓下操作可大大減少由壓力波動(dòng)造成的柱效損失。這種問題是不可修復(fù)的 7. 色譜柱內(nèi)存在緩沖鹽時(shí)，如果用高濃度甲醇或其他有機(jī)溶劑沖洗色譜柱，會(huì)導(dǎo)致柱內(nèi)緩沖鹽結(jié)晶析出，造成柱壓明顯升高。出現(xiàn)該問題時(shí)，反相色譜柱首先應(yīng)使用20%左右有機(jī)溶劑的水溶液低流速?zèng)_洗色譜柱，使柱內(nèi)的鹽全部溶解沖出，再換成高濃度甲醇或其他有機(jī)溶劑的流動(dòng)相。 8. 樣品的預(yù)處理，許多樣品，特別是生物樣品與中藥材，其組分復(fù)雜，樣品預(yù)處理是影響色譜柱壽命的關(guān)鍵。樣品經(jīng)過常規(guī)的前處理后，進(jìn)樣前還需進(jìn)行以下步驟：a.用微孔過濾膜出除去樣品中的不溶顆粒，以免賭塞柱頭篩板及柱內(nèi)填充床，使柱壓升高。b.將樣品用流動(dòng)相溶解或用與流動(dòng)相互溶的溶劑溶解。 9. 為了保護(hù)色譜柱，在色譜柱前接了一個(gè)保護(hù)柱。保護(hù)柱通常是比較短的分析柱，通過吸附可能污染分析柱的強(qiáng)保留雜質(zhì)，達(dá)到保護(hù)色譜柱的目的。保護(hù)柱的篩板與在線過濾器一樣可以阻擋微粒雜質(zhì)。為了達(dá)到Z好的保護(hù)效果同時(shí)避免導(dǎo)致色譜結(jié)果的改變，Z好選用與分析柱相同或相似的填料填充保護(hù)柱。 10. 色譜柱用合適的溶劑保存，若為C18柱推薦用甲醇保存。在日常分析中，流動(dòng)相含有的不純物質(zhì)和樣品中的某些組分會(huì)吸附在色譜柱中，隨著分析時(shí)間的延長，吸附量會(huì)越多，所以柱子要經(jīng)常清洗，一般柱子使用一兩個(gè)星期洗一次，柱子不同清洗的流動(dòng)相就不同，C18柱子常用甲醇清洗，不要用水清洗這對(duì)柱子不好，一般清洗3～4小時(shí)，另外色譜柱長時(shí)間不用，存放時(shí)要將柱子洗干凈，臟柱子放置時(shí)間越長，柱效會(huì)大大降低。存放時(shí)，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑（甲醇或乙腈），兩端封死。 近幾年化驗(yàn)室用的液相色譜儀是越來越多，所用色譜柱的種類也越來越多，問題出的也較多，值得注意的是，不論怎樣對(duì)色譜柱進(jìn)行處理，一般都很難恢復(fù)到原有水平，因此，大家再使用色譜柱之前一定要看說明書，把以上幾項(xiàng)問題搞清楚后再使用，盡量避免發(fā)生如上問題。

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