一、樣品前處理

1、所用試劑

1.1  濃鹽酸，優(yōu)級純

1.2  6mol/L 鹽酸：濃鹽酸與水1:1混合

1.3  水：去離子水

1.4  苯酚：須重蒸

1.5  19種氨基酸標準品

2、標樣配置

氨基酸混合標準儲備液：含有天冬氨酸、蘇氨酸等17種常見組成蛋白質(zhì)的氨基酸。

?；撬針藴蕛湟海河肞H2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用。

正亮氨酸標準儲備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用。

璜基丙氨酸標準儲備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用。

蛋氨酸砜標準儲備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用。

羥脯氨酸標準儲備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用。

鳥氨酸標準儲備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲備液備用。

將17種氨基酸混合標準儲備液、?；撬?、正亮氨酸、璜基丙氨酸、蛋氨酸砜、羥脯氨酸、鳥氨酸及PH2.2的檸檬酸緩沖液按照1:1:1:1:1:1:1:3配置成0.25umol/L的標準品待用。

3、前處理設(shè)備

1)     天平    

2)     水解管    

3)     量筒    

4)     無油真空泵    

5)     干浴水解、濃縮儀    

6)     移液管    

7)     0.45um濾膜    

4、樣品制備（參考歐盟飼料指令98/64/EC ）

1)樣品的準備

粉碎樣品，通過0.5mm的篩孔。高水分的樣品粉碎前必須低于50℃鼓風干燥或者冷凍干燥。高脂肪含量的樣品粉碎前必須用輕質(zhì)石油（3.12）脫脂。

2) 氧化

從準備好的樣品中稱取約0.1~1克樣品，準確到0.2mg，于100 ml帶螺紋蓋子的瓶子中，稱取的樣品應(yīng)該含有大約10mg氮，水分不能超過100mg。將瓶子放于冰水浴中冷卻至0℃，加5ml氧化試劑（過甲酸苯酚），用帶彎頭的玻璃刮勺混合。用空氣密封膜將瓶子和刮勺一起密封，密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中，放置16小時。之后，從冰箱中取出，加0.84克偏重亞硫酸鈉（3.4）來分解過量的氧化試劑。

3）水解

加入25毫升鹽酸-苯酚溶液, 然后將反應(yīng)瓶放在烘箱中，溫度控制在110攝氏度，旋松帽子（防止玻璃瓶子破裂），水解1小時。然后快速旋緊瓶塞（戴手套和護眼罩）將其繼續(xù)在烘箱110攝氏度下水解23小時。

4)加入內(nèi)標并且調(diào)節(jié)pH值到2.20

當水解反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)瓶從烘箱中取出，并且打開瓶口（戴手套和護目鏡）。冷卻后用定量加樣器準確加入15.00克(15毫升)正亮氨酸標準溶液，混合并且轉(zhuǎn)移水解溶液到250毫升的塑料燒杯中。加入大約125毫升檸檬酸緩沖液和19毫升氫氧化鈉水溶液,將實驗燒杯放入到樣品容器中用氫氧化鈉水溶液將溶液調(diào)節(jié)到pH為正好2.20。轉(zhuǎn)移一部分溶液（不需要全部）到50毫升有蓋子的塑料瓶中?？梢择R上測定或者放入冰箱等到分析的時候測定。

二、分析方法描述（Biochrom 30+）

氨基酸分析儀分析方法參數(shù)：

1)  色譜柱：Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱，4.6X20cm

2)  分離程序：

3)     運行時間：分析時間65min

4)     反應(yīng)單元溫度：135°C。

5)     檢測波長：570nm、440nm同時檢測。

附、魚料分析圖譜及做樣結(jié)果

一、樣品前處理

1、              所用試劑

必須使用重蒸餾水或與之等質(zhì)的水（電導(dǎo)率＜10μs）

1、1            雙氧水,30%

1、2            甲酸，98-100%

1、3            苯酚：須重蒸

1、4            偏重亞硫酸鈉

1、5            氫氧化鈉

1、6            鹽酸，ρ＝1.18g/ml

1、7            水解劑：6mol/l 的HCL，1L含1g苯酚：

加1g苯酚（3.3）到492mL鹽酸(3.7)中，然后用水定容至1L

1、8            20種氨基酸標準品

2、              標樣配置

   氨基酸混合標準儲備液：稱取上述各氨基酸標樣使用PH2.2的Load Buffer配置成2.5umol/L的儲備液備用。

  取氨基酸混合標準儲備液與PH2.2的Load Buffer以1:9的比例配置成0.25umol/L的標準液。

3、              前處理設(shè)備

1)        天平

2)        水解管

3)        量筒

4)        無油真空泵

5)        干浴水解、濃縮儀

6)        移液管

7)        0.45um濾膜

4、                 樣品制備（參考歐盟飼料指令98/64/EC ）

1、              樣品的準備

粉碎樣品，通過0.5mm的篩孔。高水分的樣品粉碎前必須低于50℃鼓風干燥或者冷凍干燥。高脂肪含量的樣品粉碎前必須用輕質(zhì)石油（3.12）脫脂。

2、              氧化

從準備好的樣品中稱取約0.1~1克樣品，準確到0.2mg，于100 ml帶螺紋蓋子的瓶子中，稱取的樣品應(yīng)該含有大約10mg氮，水分不能超過100mg。將瓶子放于冰水浴中冷卻至0℃，加5ml氧化試劑（過甲酸苯酚），用帶彎頭的玻璃刮勺混合。用空氣密封膜將瓶子和刮勺一起密封，密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中，放置16小時。之后，從冰箱中取出，加0.84克偏重亞硫酸鈉（3.4）來分解過量的氧化試劑。

3、              水解

 加入25毫升鹽酸-苯酚溶液, 然后將反應(yīng)瓶放在烘箱中，溫度控制在110攝氏度，旋松帽子（防止玻璃瓶子破裂），水解1小時。然后快速旋緊瓶塞（戴手套和護眼罩）將其繼續(xù)在烘箱110攝氏度下水解23小時。

4、              加入內(nèi)標并且調(diào)節(jié)pH值到2.20

    當水解反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)瓶從烘箱中取出，并且打開瓶口（戴手套和護目鏡）。冷卻后用定量加樣器準確加入15.00克(15毫升)正亮氨酸標準溶液，混合并且轉(zhuǎn)移水解溶液到250毫升的塑料燒杯中。加入大約125毫升檸檬酸緩沖液和19毫升氫氧化鈉水溶液,將實驗燒杯放入到樣品容器中用氫氧化鈉水溶液將溶液調(diào)節(jié)到pH為正好2.20。

轉(zhuǎn)移一部分溶液（不需要全部）到50毫升有蓋子的塑料瓶中?？梢择R上測定或者放入冰箱等到分析的時候測定。

二、分析方法描述（Biochrom 30+）

氨基酸分析儀分析方法參數(shù)：

1)        色譜柱：Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱，4.6′20cm

2)        分離程序：

3)        運行時間：分析時間65min

4)        反應(yīng)單元溫度：135°C。

5)        檢測波長：570nm、440nm同時檢測。

三、外標法定量

附、小雞配合飼料分析圖譜