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  西子湖與頤和園 2017-10-13 00:00:00

  色譜法的基本原理 利用樣品混合物中各組分理、化性質(zhì)的差異，各組分程度不同的分配到互不相溶的兩相中。當(dāng)兩相相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，各組分在兩相中反復(fù)多次重新分配，結(jié)果使混合物得到分離。 兩相中，固定不動(dòng)的一相稱(chēng)固定相；移動(dòng)的一相稱(chēng)流動(dòng)相。 分類(lèi)： 根據(jù)流動(dòng)相分—以氣體作流動(dòng)相—?dú)庀嗌V——固定相為液體 氣-液色譜 固定相為固體 氣-固色譜 —以液體作流動(dòng)相—液相色譜——固定相為液體 液-液色譜 固定相為固體 液-固色譜 —當(dāng)流動(dòng)相是在接近它的臨界溫度和壓力下工作的液體時(shí)——超臨界色譜 根據(jù)固定相的附著方式 —固定相裝在圓柱管中—柱色譜 —固定相涂敷在玻璃或金屬板上—薄膜色譜（平板色譜） —液體固定相涂在紙上—紙色譜（平板色譜） 根據(jù)分離機(jī)理 —分配色譜—樣品組分的分配系數(shù)不同 —吸附色譜— 樣品組分對(duì)固定相表面吸附力不同 —體積排阻色譜—利用固定相孔徑不同，把樣品組分按分子大小分開(kāi) —離子交換色譜—不同離子與固定相商相反電荷間的作用力大小不同 根據(jù)極性 —流動(dòng)相極性＞固定相極性-反相色譜 —流動(dòng)相極性＜固定相極性-正相色譜 氣相色譜只適合分析較易揮發(fā)、且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的有機(jī)化合物，而HPLC則適合于分析那些用氣相色譜難以分析的物質(zhì)，如揮發(fā)性差、極性強(qiáng)、具有生物活性、熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)。所以，HPLC的應(yīng)用范圍已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)氣相色譜。 一、吸附色譜（adsorption chromatography） 又叫液固色譜法：流動(dòng)相是液體，固定相是固體。 分離原理：固定相是固體吸附劑，吸附劑是多孔性微粒物質(zhì)表面有吸附ZX。樣品組分與流動(dòng)相競(jìng)爭(zhēng)吸附ZX。各組分的吸附能力不同，使組分在固定相中產(chǎn)生保留時(shí)間不同和實(shí)現(xiàn)分離。 固定相： 固定相通常是強(qiáng)極性的硅膠、氧化鋁、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固體吸附劑。活性硅膠Z常用。 流動(dòng)相： 弱極性有機(jī)溶劑或非極性溶劑與極性溶劑的混合物，如正構(gòu)烷烴（己烷、戊烷、庚烷等）、二氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/乙腈等。 應(yīng)用： 對(duì)于極性，結(jié)構(gòu)異構(gòu)體分離和族分離仍是Z有效的方法，如農(nóng)藥異構(gòu)體分離、石油中烷、烯、芳烴的分離。 缺點(diǎn)是容易產(chǎn)生不對(duì)稱(chēng)峰和拖尾現(xiàn)象。 二、分配色譜 原理： 固定液機(jī)械的吸附在惰性載體上，樣品分子依據(jù)他們?cè)诹鲃?dòng)相和固定相間的溶解度不同，分別進(jìn)入兩相分配而實(shí)現(xiàn)分離。 固定相：將一種極性或非極性固定液吸附在惰性固相載體上。如全多孔微粒硅膠吸附劑。 根據(jù)極性不同分類(lèi)：正相分配色譜—固定相載體上涂布的是極性固定液； 流動(dòng)相是非極性溶劑； 可分立極性較強(qiáng)的水溶性樣品； 弱極性組分先洗脫出來(lái)。 反相分配色譜—固定相載體上涂布的是非極性或弱極性固定液； 流動(dòng)相是極性溶劑； 強(qiáng)極性組分先洗脫出來(lái)。 液-液分配色譜固定相中的固定液體往往容易溶解到流動(dòng)相中去，所以重現(xiàn)性很差，且不能進(jìn)行梯度洗脫，已經(jīng)不大為人們所采用。 三、鍵合相色譜 考慮分配色譜法中固定液的缺點(diǎn)，因此將各種不同的有機(jī)關(guān)能團(tuán)通過(guò)化學(xué)反應(yīng)共價(jià)結(jié)合到固定相惰性載體上，固定相就不會(huì)溶解到流動(dòng)相中去了。 鍵合固定相優(yōu)點(diǎn)：○ 對(duì)極性有機(jī)溶劑有良好的化學(xué)穩(wěn)定性 ○使色譜柱的柱效高、壽命長(zhǎng) ○實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性好 ○幾乎適于各種類(lèi)相的有機(jī)化合物的分離，尤其是k’寬范圍的樣品 ○可以梯度洗脫 根據(jù)極性不同分類(lèi)：正相鍵合相色譜—固定相極性＞流動(dòng)相極性 固定相：二醇基、醚基、氰基、氨基等極性基團(tuán)的有機(jī)分子。 適于分離脂榮、水溶性的極性、強(qiáng)極性化合物 反相鍵合相色譜—固定相極性＜流動(dòng)相極性 固定相：烷基、苯基等非極性有機(jī)分子。如Z常用的ODS柱或C18柱就 是Z典型的代表，其極性很小。 適于分離非機(jī)性、弱極性離子型樣品， 是當(dāng)今液相色譜的Z主要分離模式。 正相HPLC（normal phase HPLC）： 是由極性固定相和非極性（或弱極性）流動(dòng)相所組成的HPLC體系。其代表性的固定相是改性硅膠、氰基柱等，代表性的流動(dòng)相是正己烷。吸附色譜也屬正相HPLC。 反相HPLC（reversed phase HPLC）： 由非極性固定相和極性流動(dòng)相所組成的液相色譜體系，與正相HPLC體系正好相反。其代表性的固定相是十八烷基鍵合硅膠(ODS柱，Octa Decyltrichloro Silane)，代表性的流動(dòng)相是甲醇和乙腈。 四、體積排阻色譜（SEC，size exclusion chromatograghy） （又稱(chēng)凝膠色譜和分子篩色譜） 原理： 以多孔凝膠（如葡萄糖，瓊脂糖，硅膠，聚丙烯酰胺等）作固定相，依據(jù)樣品分子量大小達(dá)到分離目 的。大分子不進(jìn)入凝膠孔洞，沿多孔凝膠膠粒間隙流出，先被洗脫；小分子進(jìn)入大部分凝膠孔洞， 在柱中被強(qiáng)滯留，后被洗脫。 根據(jù)樣品性質(zhì)分類(lèi)：凝膠過(guò)濾（GFC）—用于分析水溶性樣品，如多肽、蛋白、生物酶、寡聚核苷酸、多聚核 苷酸、多糖。 凝膠滲透（GPC）—用于分析脂溶性樣品，如測(cè)定高聚物的分子量。 SEC主要依據(jù)分子量大小進(jìn)行分離，因此與樣品、流動(dòng)相間的相互作用無(wú)關(guān)。因此不采用改變流動(dòng)相的組成來(lái)改善分離度。 五、離子交換色譜 （ion exchange chromatography， IEC） 分離原理：使用表面有離子交換基團(tuán)的離子交換劑作為固定相。帶負(fù)電荷的交換基團(tuán)（如磺酸基和羧酸基）可以用于陽(yáng)離子的分離；帶正電荷的交換基團(tuán)（如季胺鹽）可以用于陰離子的分離。不同離子與交換基的作用力大小不同，在樹(shù)脂中的保留時(shí)間長(zhǎng)短不同，從而被相互分離。

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  wjllyn119 2017-10-01 00:00:00

  　　按操作形式可分為：紙色譜法(按操作形式可分為：紙色譜法(PC)、薄層色譜法(TLC)、柱色譜法. ———————— 【色譜法分類(lèi)】 按兩相的物理狀態(tài)可分為：氣相色譜法(GC)和液相色譜法(LC).氣相色譜法適用于分離揮發(fā)性化合物.GC根據(jù)固定相 不同又可分為氣固色譜法(GSC)和氣液色譜法(GLC)，其中以GLC應(yīng)用Z廣.液相色譜法適用于分離低揮發(fā)性或非揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性差的物質(zhì).LC同樣 可分為液固色譜法(LSC)和液液色譜法(LLC).此外還有超臨界流體色譜法(SFC)，它以超臨界流體（界于氣體和液體之間的一種物相）為流動(dòng)相（常 用CO2），因其擴(kuò)散系數(shù)大，能很快達(dá)到平衡，故分析時(shí)間短，特別適用于手性化合物的拆分. 按原理分為：吸附色譜法(AC)、分配色譜法(DC)、離子交換色譜法(IEC)、排阻色譜法(EC，又稱(chēng)分子篩、凝膠過(guò)濾(GFC)、凝膠滲透色譜法(GPC）和親和色譜法.（此外還有電泳.） 按操作形式可分為：紙色譜法(PC)、薄層色譜法(TLC)、柱色譜法. 【色譜分離原理】 GX液相色譜法按分離機(jī)制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法、離子對(duì)色譜法及分子排阻色譜法.

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