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  zqwczc 2016-04-26 00:00:00

  牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用Z廣泛和Z普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏為微生物提供碳源和能源，磷酸鹽、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供無機(jī)鹽。在配制固體培養(yǎng)基時還要加入一定量瓊脂作凝固劑。瓊脂在常用濃度下96℃時溶化，一般實(shí)際應(yīng)用時在沸水浴中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在40℃時凝固，通常不被微生物分解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同。 由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細(xì)菌，因此，要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細(xì)菌的生長繁殖。 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方如下： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 瓊脂 15—20g 水 1000ml pH 7．4—7．6 三、器材 牛肉膏，蛋白胨， NaCl，瓊脂； 1mol/L NaOH， 1mol/L HCl； 試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，培養(yǎng)基分裝器，扭力天平，牛角匙，高壓蒸汽滅菌鍋，pH試紙（ pH 5．5—9．0），棉花，牛皮紙，記號筆，麻繩，紗布等。 四、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制作步驟 1．稱量 按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯。也可放在稱量紙上，稱量后直接放入水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然后立即取出紙片。蛋白胨很易吸潮，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴(yán)防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈、擦干，再稱取另一藥品，瓶蓋也不要蓋錯。 2．溶化 在上述燒杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。待藥品完全溶解后，補(bǔ)充水分到所需的總體積。如果配制固體培養(yǎng)基，將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂。Z后補(bǔ)足所失的水分。 3．調(diào)pH 在未調(diào)pH前，先用精密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1mol/L NaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH值，直至pH達(dá)7．6。反之，則用1mol/L HCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。注意pH值不要調(diào)過頭，以避免回調(diào)，否則，將會影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。 對于有些要求pH值較精確的微生物，其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計進(jìn)行（使用方法，可參考有關(guān)說明書）。 4．過濾 趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利結(jié)果的觀察。一般無特殊要求的情況下，這一步可以省去（本實(shí)驗(yàn)無需過濾）。 5．分裝 按實(shí)驗(yàn)要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角燒瓶內(nèi)。分裝裝置見圖Ⅴ-1。 分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。 (1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。 (2)固體分裝分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌后制成斜面，如圖Ⅴ-2。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。 (3)半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜，滅菌后垂直待凝。 6．加塞 培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能（棉塞制作方法附本實(shí)驗(yàn)后面）。 7．包扎 加塞后，將全部試管用麻繩捆扎好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙，用麻繩以活結(jié)形式扎好，使用時容易解開，同樣用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。 8．滅菌 將上述培養(yǎng)基以1．05kg/cm2（15磅/英寸2），121．3℃， 20分鐘高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時滅菌，則應(yīng)放入冰箱內(nèi)暫存。 9．?dāng)R置斜面 將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右，將試管棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。 10．無菌檢查 將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24—48小時，以檢查滅菌是否徹底。

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